实验一 植物有丝分裂标本制备与染色体核型分析.docVIP

PAGE PAGE 27 遗传学实验技术 编写：洪亚辉 赵 燕 黄丽华 主审：张学文 湖南农业大学植物科学实验教学中心 2006年9月 目 录 实验一、植物有丝分裂标本制备与染色体核型分析…………………2 实验二、孟德尔分离规律和自由组合规律的验证……………………7 实验三、基因的连锁交换和基因定位…………………………………12 实验四、数量性状的遗传分析…………………………………………16 实验五、植物多倍体的人工诱导和鉴定………………………………20 实验六、微核检测技术…………………………………………………22 实验七、染色体显带技术和带型分析…………………………………24 实验一、植物有丝分裂标本制备与染色体核型分析 一、实验目的 通过对植物组织的取材、预处理、解离、染色、压片等制片步骤的学习，掌握植物制片技术，奠定细胞遗传学的研究技术；分析植物细胞有丝分裂中期染色体数目、大小、着丝粒位置和随体等形态特征，学习染色体组型分析的方法，为物种起源和进化提供依据，为遗传育种研究提供细胞学证据。 二、实验原理 有丝分裂是植物细胞分裂的主要方式。通过有丝分裂增加细胞的数量而使植物有机体不断生长。在有丝分裂过程中，核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，使子细胞和母细胞的遗传组成一样，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，常进行着剧烈的细胞有丝分裂。在细胞分裂的适当（分裂旺盛期）时候取材，进行预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，使细胞、染色体分散，便于在显微镜下观察染色体的形态特征和变化特点及进行染色体计数。 各种生物染色体的形态，结构和数目都是相对稳定的。每一生物细胞内特定的染色体组成叫染色体组型。染色体组型分析也称核型分析。通过一定的方法制得染色体有丝分裂的玻片标本，经显微照相，冲洗放大等步骤获得染色体照片。从染色体玻片标本和染色体照片的对比分析，进行染色体分组，并对组内各染色体的长度，着丝点位置，臂比和随体有无等形态特征进行观测和描述，从而阐明生物的染色体组成，确定其染色体组型，这种过程称为染色体组型分析。染色体组型分析在细胞遗传学、现代分类学、生物进化和遗传育种学等研究中，是重要的研究手段。 三、实验材料 蚕豆（Vicia faba， 2n=12）干种子 四、实验仪器及用具 多媒体显微演示系统、显微照相系统、培养箱、分析天平、水浴锅、酒精灯、剪刀、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸、铅笔、标签纸、棕色瓶、相片冲洗放大整套设备、目镜测微尺、镜台测微尺、4＃放大纸、135黑白胶卷、计算器、透明尺、坐标纸、胶水等。 五、药品和试剂 秋水仙碱、8－羟基喹啉、苏木精、水合三氯乙醛、铁矾、无水酒精、冰醋酸、1N盐酸、50％丙酸米吐尔、无水亚硫酸钠、几奴尼（对苯二酚）、无水碳酸钠、溴化钾、硫代硫酸钠、硼酸、钾矾、28％醋酸等。 六、实验步骤 （一）材料准备： 1.蚕豆根尖：选取新鲜无病斑的蚕豆干种子，经日晒后，放在烧杯内，室温下清水浸泡一昼夜。种子吸水膨胀后，放在搪瓷盘上20℃左右保湿培养（双层纱布覆盖），待根长1~2cm时，剪下根尖备用。 （二）预处理 为了获得较多中期分裂相的细胞，同时使染色体缩短和分散，可对根尖进行预处理，处理方法如下： 1.0.05％~0.2％的秋水仙碱水溶液处理2~4小时。 2.0.002M的8~羟基喹啉溶液处理3~4小时。 3.根尖浸在蒸馏水中于在1~4℃低温下处理24小时。 （三）固定： 用蒸馏水洗净材料，再用卡诺氏（冰醋酸:无水酒精=1:3）固定液（用量应为材料体积的15倍以上）室温下固定30~60分钟。经90％酒精→80％酒精→70％酒精（各半小时）浸泡进行转换，最后置于70％酒精内放入0~4℃冰箱保存。 （四）解离： 根尖、茎尖等体细胞需经处理，除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，才便于压片。这种处理过程称为解离，解离时间的长短依植物材料和解离液的不同而不同。时间短细胞不易压散，时间过长，细胞被压破，且影响染色效果。 方法：固定的材料（蚕豆根尖）用蒸馏水冲洗2遍，然后放入预热的60℃的1N盐酸中，60℃恒温处理5分钟左右，倒去盐酸，用蒸馏水冲洗3遍后，将材料浸泡在蒸馏水中2小时。 （五）染色液和制片 染色液： （1）丙酸－铁矾苏木精 　 贮存组：A液：苏木精2克，溶于100ml 50％丙酸， 　　　　　 B液：铁钾矾0。5克溶于100ml 50％丙酸。 　 染色液：A液和B液等量混合，每5ml的A液和B液的混合液中加入2克水合三氯乙醛，充分溶解摇匀，存放一天后使用。 2. 制片： 选取已处理过的根尖一枚，放在干净载玻片中央，除去非分生组织的部分，并吸去多余水分。另取一张干净载玻片，呈十字形交叉盖