第十章 色谱法概论.pptVIP

第十章 色谱法概论 色谱法的发展 历史 30年代 茨维特分离绿叶色素，产生固液吸附色谱 40年代 液—液分配色谱法 、TLC、纸色谱 50年代 GC出现使色谱具备分离和在线分析功能 60年代 推出了色谱－质谱联用技术（GC-MS） 70年代 HPLC出现使色谱分析范围进一步扩大 80年代 出现了超临界流体色谱法、毛细管电泳法 90年代 崛起的电色谱法，兼有毛细管电泳法与微 微填充柱色谱法的优点 21世纪 色谱科学将在生命科学等的前沿发挥他不可替代的重要作用 2、展望 ⑴新型固定相和检测器 ⑵色谱新方法的研究 ⑶色谱联用技术 GC-MS、LC-MS、GC-FTIR ⑷色谱专家系统 是一种色谱－计算机联用技术 色谱法的特点 （1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。 （2） 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。 （3） 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。 （4） 应用范围广 气相色谱：沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。 色谱法不足之处： 因为定性需要已知物质，被分离组分的未知物质定性较为困难，需要借助MS，NMR，IR等手段。 三、 基线 (Base line) 无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。它反映了随时间变化检测器系统噪声，稳定的基线是一条平行于横轴的直线 四、峰高(h) 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离,上图BA段。 五、 色谱峰区域宽度 是色谱流出曲线的重要参数之一，用于衡量柱效率及反映色谱操作条件的动力学因素。 （1）标准偏差(?)：即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半，上图EF段； （2）半峰宽(W1/2)：色谱峰高一半处的宽度 W1/2 =2.355?，上图GH段； （3）峰底宽（基线宽度）(W)：即色谱峰两侧拐点上的切线在基线上截距间的距离。 W=4?=1.699W1/2 ，上图IJ段。 六、拖尾因子（tailing factor）又叫对称因子，用于衡量色谱峰的对称性。 七.保留值 （一）保留时间 1.死时间tM ：不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积，如下图。 2.保留时间tR 组分从进样到在柱后出现峰极大点所需的时间，称为保留时间，O′B。 3.调整保留时间tR′ 组分的保留时间与死时间之差值，即组分在固定相中滞留的时间 tR′=tR－tM （二） 保留体积 1.死体积 VM ：由进样器至检测器的流路中未被固定相占有的空间。包括色谱柱内固定相颗粒间剩余空间、色谱仪中管路和连接头间的空间，检测器的空间总和，后面两项很小可忽略不计。 VM=tM× FC （tM死时间，FC流动相的流速 mL/min ） 2.保留体积 VR ： 由进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大时,所需通过色谱柱的流动相的体积 VR=tR× FC 3.调整保留体积 VR′： 是由保留扣除死体积后的体积 VR′=VR－VM=tR′× FC （三）相对保留值 ri，s 某一组分i的调整保留值与标准物s的调整保留值之比，称为组分i对标准物s的相对保留值ri，s 　　 相对保留值是衡量分离情况的重要参数，大多数手册上可查到。 因其只与色谱柱种类及柱温有关，故也是重要的定性指标。当柱温、固定相不变时，即使柱径、柱长、流动性流速有所变化，ri，s仍保持不变。 色谱流出曲线的意义 由色谱流出曲线可以实现以下目的： （1）根据色谱峰的数目，可以判断试样中所含组分的最少个数。 （2）根据色谱峰的保留值进行定性分析。 （3）依据色谱峰的面积或峰高进行定量分析。 （4）依据色谱峰的保留值以及峰宽评价色谱柱的分离效能。 （5）根据色谱峰间的距离，评价色谱条件的选择是否合理 一. 分配系数和保留因子与保留时间的关系 （一）分配系数(K) 组分在固定相和流动相之间发生的吸附、脱附和溶解、挥发过程，叫做分配过程。 色谱分离是基于组分在两相中的分配情况不同，可用分配系数描述。 分配系数：在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值 讨论 K为热力学常数 与组分性质、固定相性质、流动相性质及温度有关，是每个组分的特征值。 实验条件固定，K仅与组分性质有关 （二）保留因子（容量因子、分配比）（k） 　定义为溶质分布在固定相和流动相的分子数或物质的量