层析和膜技术在生物制药中的应用.pdfVIP

层析技术在层析技术在生物制药中的应用生物制药中的应用 一一. 离子交换层析技术离子交换层析技术 定义：利用溶液中各种带电颗粒与离子交 换剂之间结合力的差异进行物质分离的操换剂之间结合力的差异进行物质分离的操 作称离子交换法。 离子交换剂由惰性的不溶性载体离子交换剂由惰性的不溶性载体，，功能基功能基 团和平衡离子组成。 平衡离子带正电荷的为阳离子交换剂，平 衡离子带负电荷的为阴离子交换剂衡离子带负电荷的为阴离子交换剂，，可见可见 离子交换剂是一类具有活性基团的荷电固 相颗粒相颗粒。。 离子交换层析技术离子交换层析技术 离子交换反应： ++ ++ ++ ++ RR—SOSO —XX +Y+Y == RR—SOSO —YY +X+X 3 3 离子交换剂与交换离子间的作用是由静电引力而产生的离子交换剂与交换离子间的作用是由静电引力而产生的，， 是一个可逆的反应过程，当这个反应达到动态平衡时，其 平衡点随着pH、温度、溶剂的组成及交换剂本身性质的改 + 变而变化。例如，向平衡体系中加入过量的X 离子，反应 + 倾向于生成R-SO -X 。 3 离子交换层析技术离子交换层析技术 由于待分离的溶质分子带有不同性质的 电荷和不同电荷量，因而在作为固定相的 离子交换剂和流动相的洗脱液之间发生可离子交换剂和流动相的洗脱液之间发生可 逆交换作用逆交换作用，，并通过调节并通过调节pHpH值值 、、或改变同或改变同 性离子的浓度等方法性离子的浓度等方法，，使溶质分子移动的使溶质分子移动的 速度发生变化，从而达到分离的目的。 离子交换层析的应用离子交换层析的应用 如庆大霉素，小诺霉素的提炼，应用了离子交换技术。 ++ HH 中和中和 732732树脂树脂 庆大发酵液 中性Solu 饱和树脂 [[静态吸附静态吸附]] 洗涤、洗脱 洗脱液洗脱液 进一步处理进一步处理 庆大霉素的提炼庆大霉素的提炼  酸化的目的在于将庆大霉素从菌丝体中释放出来，然后为 了便于离子交换，将酸化液中和，再于中性溶液中投入732强 酸性阳离子树脂。因为庆大霉素属于碱性抗生素，系有机碱， 能与多种酸成盐能与多种酸成盐，，在水溶液中以离子状态在水溶液中以离子状态G+G+存在存在，，可以为阳可以为阳 离子树脂所吸附，对吸附了庆大霉素的732树脂进行洗涤，先 用稀酸洗至无用稀酸洗至无Ca2+Ca2+、、Mg2+Mg2+，，接着用无盐水洗至无接着用无盐水洗至无ClCl--，，然后用然后用 稀氨洗去小组分杂质，最后用浓氨进行洗脱，洗脱液（解吸 液液 ））用用711711阴离子树脂进行脱色阴离子树脂进行脱色，，然后经浓缩然后经浓缩，，转盐转盐、、活性炭活性炭 脱色，喷雾干燥即得庆大霉素成品。  离子交换层析的应用 粗卵蛋白的分级分离  卵蛋白中卵蛋白中：：主要有卵清蛋白主要有卵清蛋白 54-57%（pI4.5)；蓝清蛋白 1212--15%15% （（pI6.1)pI6.1)；；卵粘蛋白卵粘蛋白 3-4%(pI4.7)。  卵白过滤卵白过滤，，用用 polybuffer74稀释，离心， 上上PBE94PBE94柱柱，，以以0.025mol/L0.025mol/L咪咪 唑-HCl (pH7.2)平衡，用 1:10polyb