多头带绦虫HSP60、p36功能初步探究及AgB、TPx诊断价值评估.pdfVIP

中文摘要 脑多头蚴病（Cerebral coenurosis）又称脑包虫病，是由多头带绦虫（Taeniamulticeps） 的中绦期幼虫寄生于人和动物的中枢神经系统等部位所引起的一种危害严重的人兽共 患寄生虫病。本病呈世界性分布，多发于草食动物养殖为主的国家和地区，我国尤以西 北、华北、东北等广大牧区常见，甘肃、宁夏、青海、新疆等局部地区羊群发病率可达 53%，给以畜牧业为主要经济来源的国家和地区带来了严重的危害。因此有效的预防以 及准确诊断是控制该疾病的重要环节。本研究对多头带绦虫的热休克蛋白60 Tm-HSP60 p36 Tm-p36 （ ）及小热休克蛋白 （ ）进行了功能的初步探究，筛选出对于该 疾病防控诊治的潜力靶点，为多头带绦虫相关蛋白的研究提供重要的参考数据和资料。 同时，本研究还评估了诊断抗原Tm-HSP60、多头带绦虫的B 抗原 （Tm-AgB）、硫氧 还蛋白过氧化物酶 （Tm-TPx）的血清学诊断潜力，选择出最具诊断潜力的抗原，为该病 的准确诊断提供可靠的技术支持。 一、多头带绦虫HSP60、p36基因的分子特征分析及初步功能探究 本研究旨在对多头带绦虫HSP60 及p36 的分子特性进行分析，为疾病的控制和诊 断提供思路。本研究克隆表达了多头带绦虫基因Tm-HSP60 和Tm-p36。利用免疫印迹 rTm-HSP60 rTm-p36 法检测重组蛋白 和 的免疫反应性。采用免疫组织化学和相对荧光定 量方法分析其在多头带绦虫不同生命阶段的组织定位和转录水平。重组蛋白rTm-HSP60 和rTm-p36 具有典型的高保守性。Tm-p36 具有两个N 端α-晶体结构域是后生动物小热 休克蛋白的特征。Tm-HSP60 具有较强的免疫反应性。Tm-HSP60 广泛分布于多头带绦 虫的各个阶段，但其分布水平相对较低；而Tm-p36 则在六钩蚴、原头蚴阶段中特异性 分布。对这两种热休克的序列、结构和功能分析表明，它们可能作为分子伴侣在多头绦 虫的生命周期中起着重要的作用。Tm-HSP60有更强免疫反应性，具有血清学诊断潜力。 Tm-p36 与六钩蚴的激活密切相关，具有作为疫苗靶点的潜力。 AgB TPx 二、多头带绦虫 、 的原核表达及诊断价值评估 本研究旨在选择一个合适的抗原建立快速、准确的诊断方法。在本研究中，我们克 隆并表达了重组蛋白rTm-AgB和rTm-TPx，评估它们的血清学诊断潜力，建立间接ELISA rTm-HSP60 rTm-AnxB2 rTm-HSP70 rTm-GST 方法，并与先前报道的 、 、 和 进行比较。结 I 果表明，以rTm-AgB 建立的ELISA 方法具有95.8%的敏感性，特异性为87.5%，具有 较强的血清学诊断潜力；利用以rTm-AgB 建立的方法进行临床检测，发现 100 份山羊 18 血清中有 份为阳性。本研究筛选出一种潜在的血清学诊断抗原，为今后动物脑多头 蚴病的诊断提供了可靠的工具。 关键词：多头带绦虫；脑多头蚴病；重组蛋白；免疫荧光；相对荧光定量PCR；血 清学诊断 II Molecularcharacterization andexpression analysisoftwo heat-shockproteins andevaluationofthediagnosticpotential of AgB,TPxin Taeniamulticeps Abstract Coenurosis is a serious zoonotic parasitic disease caused by the metacestode (Coenurus cerebralis) of Taenia m