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革兰染色法 一、实验目的 掌握革兰染色的操作技术及油镜的使用。 二、实验原理 ------复染色法 1、细胞壁结构差异： G＋菌肽聚糖层数多，结构致密， 缺乏脂质成分，不易脱色。 2、等电点差异：G＋菌较低，带较多负电荷，与碱性染料（结晶紫）结合力牢固，不易脱色。 3、细胞内容物差异： G＋菌中核糖核酸镁盐含量高，与染料结合力牢固，不易脱色。 三、材料与器材 菌种： 大肠杆菌，金黄色葡萄球菌 革兰氏染色液： Ⅰ液：结晶紫 Ⅱ液：卢戈碘液 Ⅲ液：95%乙醇 Ⅳ液：稀释的石碳酸复红 接种环、载玻片、酒精灯、显微镜。 四、实验方法 1、制片： 涂片：取2-3环生理盐水置载玻片，取少许细菌在 生理盐水里研磨成1cm直径的菌膜； 干燥：室温自然干燥； 固定：将载玻片在外焰上快速通过3次。 2、染色： 初染1min：结晶紫染覆盖菌膜区，1 min，水洗； 媒染1min：卢戈碘液覆盖菌膜区，1 min，水洗； 脱色：95%酒精覆盖菌膜区，20 s ，2次，水洗； 复染30s：稀释石炭酸复红覆盖菌膜区，30 s，水洗 3、干燥：玻片放滤纸间以吸干玻片水分； 4、镜检：菌膜区加香柏油，油镜下观察。 五、实验结果 六、革兰染色法意义 鉴别细菌 选择药物 研究细菌致病性 七、注意事项 注意“无菌操作” 涂片时，细菌不宜多。 注意控制好脱色程度。 * * 脂多糖 孔蛋白 脂蛋白 肽聚糖 外膜 细胞膜 周浆间隙 肽聚糖 磷壁酸 细胞壁 细胞膜 G-菌细胞壁 G+菌细胞壁 G+菌（蓝紫色 ） G-菌（红色） 形态： 染色： 排列方式： Step1 step 2 step 3 step 4 革兰染色过程
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