（推荐医学）实验二血清蛋白电泳实验.pptVIP

计 算 设各部吸光度分别为AA、Aa1、Aa2、Aβ、Aγ。吸光度总和（AT）为： AT= AA+Aa1+Aa2+Aβ+Aγ 白蛋白（%）＝（AA *2 AT）*100% a1-球蛋白（%） = （Aa1 AT）*100% …… 注意事项 通电时，不得接触槽内缓冲液或CAM，以防触电 缓冲液液面要保证一定高度 标本：血清应新鲜，不得溶血 染料：对蛋白质的各组分亲和力相同，水溶性好，稳定，吸光度敏感，形成的染料蛋白质复合物稳定且易洗脱比色 注意事项 电泳后区带拖尾、各区带分开不明显原因： 点样过多 点样不均匀、不整齐 样品触及薄膜边缘；薄膜过湿，样品扩散； 薄膜未完全浸透或温度过高导致干燥或水分蒸发薄膜与滤纸桥接触不良 薄膜位置歪斜、弯曲，与电流方向不平行 缓冲液变质；样品不新鲜 CAM质量不高等 电渗现象 评 价 优点：CAM电泳具有灵敏度高，标本用量少，分辨率高，区带清晰，电泳时间短，操作简便快捷；CAM对染料不吸附，蛋白区带均匀，背景清晰，既易比色定量，又易透明后进行光密度扫描。 缺点：有轻微电渗现象，薄膜吸水性差，电阻容易增大，当电流较大时，薄膜中水分极易蒸发，造成蛋白质分子变性破坏。 临床意义 丽春红S染色参考范围 蛋白质组分 g/L 占总蛋白的百分数(%) 白蛋白 35～52 57～68 α1-球蛋白 1.0～4.0 1.0～5.7 α2-球蛋白 4.0～8.0 4.9～11.2 β-球蛋白 5.0～10.0 7.0～13.0 γ-球蛋白 6.0～13.0 9.8～18.2 各组分构成 Alb：白蛋白 α1：α1酸性糖蛋白；α1抗胰蛋白 酶；甲胎蛋白；高密度脂蛋白 α2：触珠蛋白；铜兰蛋白；α2巨球蛋白；α脂蛋白 β：转铁蛋白；补体系统；β脂蛋白 γ：IgG；IgM；IgA；IgD；IgE； CRP 临床意义 肝病型： Alb降低 β和γ-球蛋白增高 出现β和γ难以分离，出现 “β-γ桥”，此现象往往是由于IgA增高所致， IgA与肝纤维化有关。见于急慢性肝炎和肝硬化。 临床意义 M蛋白血症型 Alb轻度降低 单克隆γ球蛋白（M蛋白）增高 在β与γ-球蛋白区或γ-球蛋白区出现一条致密浓集的M蛋白带 见于MM、巨球蛋白血症等 临床意义 肾病型：表现为白蛋白及γ-球蛋白降低， α2 和β-球蛋白升高。见于急慢性肾炎、肾病综合征、肾功能衰竭等。 炎症型：表现为α1、α2 和β三种球蛋白均增高，见于各种急、慢性炎症和应激反应。 蛋白缺乏症：主要包括α1抗胰蛋白酶缺乏症、 γ-球蛋白缺乏症等（较少见） 双白蛋白血症型 主要特征：在白蛋白部位有两个区带，扫描出现双峰，呈剪刀状。 产生原因： 持久型主要是一种家族性血清蛋白异常的疾病，极少见，为常染色体不完全显性遗传； 暂时型主要是指肾功能不全的患者在治疗期间使用大剂量的β-内酰胺类抗生素，可形成快泳动性的白蛋白成分，治疗中断即逐渐消失。 先天性白蛋白缺陷型 主要特征：由于血清白蛋白的显著降低，血清总蛋白也随之降低，α1、α2球蛋白明显增高，γ球蛋白也增高。 严重无白蛋白血症时，白蛋白有时可降为零。 产生原因：本病是极少见的先天性疾病，可能由于肝细胞内白蛋白合成功能遗传性缺陷或明显低下所致。 MM的电泳图谱 思考题 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳后为何会有区带拖尾及分开不明显的情况？如何避免？