临床色谱质谱检验技术：第三章 生物样品制备（四）.pptVIP

第三章 生物样品制备;一、常用样品制备技术 ;一、常用样品制备技术;液液萃取;定义 是一种基于液相色谱分离的样品制备方法，依据样品基质各种组分在固定相和流动相间分配系数的不同，使目标分析物得以保留和净化，同时选择性地去除样品基质中的干扰成分。 目的 分离、除去干扰、净化基质和富集目标分析物 ;SPE结构 SPE产品形式 针筒形式 过滤嘴形式 96孔板形式 在线 SPE柱 ;（三）固相萃取;SPE配套装置;（三）固相萃取;（三）固相萃取;（三）固相萃取;（三）固相萃取;（三??固相萃取;（三）固相萃取;（三）固相萃取;（三）固相萃取-举例;（三）固相萃取-举例;液液萃取; 利用化学反应将生物样品中难以分析检测的目标化合物定量地转化成类似化学结构且易于分析检测的化合物，通过对衍生化产物的检测间接对目标分析物进行定性或定量分析。;条件 反应能迅速、定量地进行，反应重复性好，反应条件不苛刻，易操作； 反应的选择性高，最好只与目标化合物反应； 衍生产物只有一种，反应的副产物和过量的衍生化试剂应不干扰分离与检测； 衍生化试剂应方便易得，通用性较好。;气相色谱中常用的衍生化方法 ;液相色谱中常用的衍生化方法;（四）衍生化;（四）衍生化;遗传代谢病 氨基酸和酰基肉碱测定 氨基酸类正丁醇衍生化反应式为： 酰基肉碱类正丁醇衍生化反应式为： ;遗传代谢病 尿液有机酸 衍生化试剂 BSTFA+TMCS(99:1) ； BSTFA：双(三甲基硅基)三氟乙酰胺； TMCS：三甲基氯硅烷 ;样品制备技术比较;二、自动化样品制备技术;技术人员进行样本接收;临床色谱质谱实验室检测工作流程-时间占比;临床色谱质谱实验室检测工作流程—出错来源;临床色谱质谱实验室检测工作流程-手工与自动分配;前处理自动化;技术人员进行样本接收;前处理自动化;自动化样品制备技术;工作原理 基于空气置换原理，通过通道内活塞的移动来推动空气进行吸液和放液。 将单通道移液器组合起来，通过操作系统控制机械臂完成移液过程，探测液面高度，能够快速准确地完成大批量液体的连续转移、分液、稀释、混合、合并等多种液体处理工作的设备。 系统组成 操作平台、机械臂、移液通道、实验用品载架、辅助设备和控制器 ; ;（一）离线自动化-自动化液体处理工作站; 工作原理 固相萃取法 系统组成 操作平台、机械臂、注射泵、实验用品载架和控制器 ;（一）离线自动化-自动化固相萃取;在线固相萃取（Online SPE） 实现了SPE的上样、清洗和洗脱的程序化在线自动处理，分析物被洗脱至分析柱上，进行液相色谱分离，与此同时，开始另一个样品的SPE提取循环。 ;（二）在线自动化-在线固相萃取;（二）在线自动化-在线固相萃取;涡流色谱技术（Turbo Flow） 仪器设置类似于在线固相萃取，但流动相的流速是经典液相色谱的10到100倍。 大分子蛋白不进入填料的微孔中而直接洗脱，小分子则可以扩散进入微孔中保留，在柱切换后，小分子可以以经典的液相条件洗脱出来，转移到分析柱上进行下面的LC-MS分析。 ;（三）其他自动化制备技术;（四）自动化制备技术特点;三、小结与思考;液液萃取;小结 2;小结 3-生物样品制备技术比较;固相萃取的基本操作步骤有哪几个？ 影响固相萃取效率的因素？ 临床色谱质谱实验室常用的衍生化方法？ 自动化样品制备技术有哪些？ ;Thanks