《血涂片制备和染色》.pptVIP

吉姆萨染料 1.0g 甘油 66.0ml 甲醇（AR） 66.0ml [染色方法] 1. 甲醇固定干燥血膜3-5min 2. 将血膜在染液中浸染10-30min 3. 流水冲洗,待干后镜检 [试剂] （三） 瑞氏-吉姆萨染色 【原理】 将瑞特染料和吉姆萨染料按一定比例混合后对细胞进行染色，其染色原理同瑞特和吉姆萨染色法，但染色效果更佳，因为其综合了瑞士和吉姆萨染色法的优点。 【瑞氏-吉姆萨染色试剂】 瑞特染料 1.0g 吉姆萨染料 0.3g 甲醇 加至500ml 先将瑞特染料和吉姆萨染料充分研磨混匀，甲醇溶解倒入容器中，未溶解完的继续加入甲醇研磨，重复多次，最后把染液加至500ml。 [瑞氏-吉姆萨染色方法] 血片滴加染液5滴盖满血膜，2min后加入pH6.4-6.8磷酸盐缓冲液（同瑞氏染液）缓冲液10滴，10min后用流水冲洗干净，待干后镜检。 【方法学评价】 瑞氏染液和吉姆萨染液对细胞进行染色时有各自的显色特征，前者对细胞质和颗粒着色较好，后者对细胞核结构显示清晰。因此将二者结合，能取长补短、集中优势，用该混合染液对血细胞进行染色，其细胞核、细胞质和细胞内颗粒均着色鲜艳，对比鲜明。瑞氏-吉姆萨混合染色法是临床上广泛使用的方法。 六、血细胞显微镜计数法 Xingyue 六、血细胞显微镜计数法 （一）原理 用一定的稀释液将标本作定量稀释，混匀充入计数池中，在显微镜下计数一定容积中的血细胞数，经换算求得每升血液中的血细胞总数。 血细胞计数 人工显微镜计数法 自动血细胞计数仪法 Xingyue 直接计数法 间接计数法 半自动 （二、三分群） 全自动 （五分群） 显微镜细胞计数法 【测定方法及评价】 将样本做适当稀释（或浓缩），充入细胞计数池，在显微镜下计数计数板中一定体积内细胞数，经换算得每升标本的细胞数。 如：血液RBC、WBC、PLT、嗜酸细胞、嗜碱细胞、淋巴细胞和单核细胞直接计数，体液细胞计数（尿中细胞管型、精液中精子计数、脑脊液及浆膜腔积液细胞计数）等。 该法计数误差较大，费时、费力，已不能适应大批量标本的测定，将逐渐被血细胞分析仪所取代。 Xingyue 【试剂】 各种不同的专用稀释液或染色稀释液。 【器材】 （1） 显微镜 （2） 微量吸管：Hb吸管：10、20μl两刻度 ★毛细玻璃吸管：10、20μl两刻度 一人一管，定期用水银称重法进行校正 误差应 ±1% （3）计数板：血细胞计数板，常用改良Neubauer计数板 计数板的构造： （4）血盖片 规格24mm×20mm×0.6mm， 要求：表面平整（不平整性＜0.002mm），高倍镜检查无裂痕，且本身有一定的重量。 Xingyue 血细胞计数板的构造 24×20×0.6mm 1855 年 发明计数红细胞的计数板 血细胞计数板法是最可靠和最经典计数技术 改良Neubauer 计数板 计数池划线 1 mm 1mm 计数池 计数池划线 美国国家标准局（NBS） 1941年规定：计数池大方格每边长度的误差应在 ±1%内（1±0.01mm）;血盖片与计数池间缝隙深度应在±2%以内(0.1±0.002mm)。 【操作】（以血WBC计数为例） WBC稀释液0.38ml+血20μl 混匀后30s后灌板,静置2～3min后 以低倍镜计数四角4个大方格内WBC数 （计数原则） 计算 WBC数/L =四个大方格细胞数/4×10×20×106/L =四个大方格细胞数×0.05×109/L Xingyue 质量控制 (一)、技术误差 1、采血部位不当 2、血液凝固 3、稀释倍数不准 4、充液不当 5、识别错误 6、器材不符合要求 (二)、固有误差（inherent errors) 泊森分布： SD=m CV= 注：SD为标准差 、m为计数的平均数 、CV为变异系数。 由此，计数范围大，计数细胞多，计数误差就小。 1/2 1 m 1/2 血涂片制备和染色 复习 血液标本采集和抗凝剂选择 血标本： 全血：血细胞+血浆;临床血液学检查，血细胞计数、分类和形态 学