表达新城疫病毒F蛋白重组火鸡疱疹病毒的构建及免疫原性初步评价.pdfVIP

摘 要 重组活载体疫苗是一种以病毒或细菌为载体，将外源保护性抗原基因通过基因工程技术插入 载体中并使之表达的疫苗。重组活载体疫苗具有诱导机体产生广泛、长期的免疫反应等优点，并 且此类疫苗可同时表达多种抗原，具有成为多价或多联疫苗的潜力，是当下和未来疫苗研制的主 要方向之一。马立克氏病病毒（MDV ）属疱疹病毒科，其较大的基因组和多个可供外源基因插入 的复制非必须区域使之成为构建重组活载体疫苗的良好载体，其中血清3 型MDV 为火鸡疱疹病 毒 （HVT ），做为疫苗来预防马立克氏病已有50 余年，同时HVT 也常被用做载体来表达外源基 因。HVT 作为载体有许多优势：可接种1 日龄雏鸡，不受母源抗体抗扰；非人畜共患，使用安全； 一次接种后可持续刺激抗体的产生，无需多次加强免疫；相对于其他全病毒疫苗，只表达保护性 抗原成分，不存在毒力返强的风险，并且便于进行免疫监控。 新城疫（ND ）是由新城疫病毒（NDV ）强毒株引起的一种禽类烈性传染病，该病致死率极 高。对禽类养殖业造成了不可估量的损失。近年来，非典型新城疫的发病率不断增加，呈不同程 度的地方性流行，并且在免疫鸡群中也有发生。造成这种现象的原因主要为高水平母源抗体导致 的传统疫苗效力降低和 ND 流行株与疫苗株基因型不匹配等。因此，研制新型有效的疫苗对于 ND 的防控具有重要意义。本研究旨在建立能够高效拯救病毒的HVT 粘粒拯救系统，再将NDV 流行株F 基因的表达框架插入其中，构建重组病毒并评价其免疫效力，为有效防控新城疫和马立 克氏病提供技术支持，具有重要的应用价值。 本研究将HVT FC126 株基因组分段插入Fosmid 粘粒载体pCC 1Fos 中，构建了FC 126 株基 因组粘粒文库；在此基础上，选取粘粒组合，共转染鸡胚成纤维细胞，建立了HVT FC126 疫苗 株多片段粘粒拯救系统。通过该拯救系统，将NDV 基因VII 型流行株LHLJ/01/06 株F 基因表达 框架插入HVT 基因组HVT065 和HVT066 基因之间，构建了重组病毒rHVT-NDV-F 。PCR 和测 序鉴定表明，F 基因表达框架成功插入 FC 126 株基因组。间接免疫荧光试验表明，重组病毒 rHVT-NDV-F 能够表达F 蛋白。rHVT-NDV-F 重组病毒与其亲本病毒HVT FC 126 株在体外细胞 上的复制能力无显著差异。经过连续传代后，重组病毒rHVT-NDV-F 基因组中的F 基因表达框架 可稳定存在并表达 F 蛋白。对 rHVT-NDV-F 重组病毒进行攻毒免疫保护试验，重组病毒 rHVT-NDV-F 对 NDV 基因 IX 型强毒 F48E9 株的保护率为 80%，对NDV 基因 VII 型流行株 LHLJ/01/06 的保护率为70% 。 综上，本研究构建了HVT FC126 株病毒拯救系统，及能够表达NDV 基因VII 型F 蛋白的重 组病毒rHVT-NDV-F ；rHVT-NDV-F 的体外复制能力与亲本株无显著影响且具有良好的遗传稳定 性；该重组病毒能够对当前流行的基因VII 型NDV 攻毒提供较好的保护，具有作为ND 重组HVT 活载体疫苗的潜力。 关键词：新城疫，火鸡疱疹病毒，重组病毒，F 基因 I Abstract The recombinant vector vaccine is a live vaccine that uses genetic engineering technology to construct a virus or bacteria into a vector, and then inserts the foreign gene into the vector and expresses it. Such vaccines can induce the body to produce a wide range of immune responses, and recombinant live vector vaccine can simultaneously express multiple antigens and have the