细胞几何形状影响肿瘤细胞自噬的分子机制.pdfVIP

摘要 摘要 肿瘤细胞被嵌入高度结构化的微环境中，微环境中的胞外基质（ECM ）和邻近 细胞给肿瘤细胞施加了特定的压力和边界，不仅能够影响细胞的结构和力学特性， 还影响细胞的极性和功能。同样，肿瘤细胞的发生发展与其微环境是密不可分的， 它为肿瘤细胞的增殖，扩散，耐药等一系列行为提供所需的各种代谢物和因子。肿 瘤细胞与微环境两者的关系既是相互依存，相互促进，又是相互拮抗，相互斗争的。 将细胞微图案化是研究细胞对特定微环境线索反应的一种高效方法，从而突出了 微环境的机械和几何特性在细胞生理学的研究中关键作用。自噬作为一种能够维 持体内平衡的高度保守分解的代谢途径，负责大量多余的功能失调的蛋白质和细 胞器的降解。一方面，自噬可以产生细胞保护机制清除自身老化的蛋白质和受损的 细胞器；另一方面，肿瘤细胞可以利用自噬减轻细胞生存压力这一特性，作为抵抗 化疗的生存机制，促进肿瘤细胞生长和增殖。但是，肿瘤细胞几何形态和自噬之间 的机制尚不清楚。所以，探究细胞几何形态和自噬的机制可以为临床肿瘤治疗提供 一个新的思路。 本研究选取黑色素瘤A375 细胞作为实验对象。通过微接触印刷技术制备不同 形状的印章，模拟体内高度结构化的肿瘤微环境，探究细胞几何形状对肿瘤细胞自 噬的影响机制。在本研究中将黑色素瘤细胞 A375 分别接种在面积均为 1000 µm2 的三角形、圆形以及横纵比为1:1、1:4 的矩形微图案基底上，培养24 h ，利用免疫 荧光技术检测加入雷帕霉素后不同形状细胞中细胞自噬标志物 LC3B 的数量，结 果表明在横纵比为 1:4 的矩形微图案基底上的细胞LC3B 的数量较多。研究表明， YAP 是细胞机械转导转录共激活因子。于是进一步沉默YAP 检测细胞的自噬情况， 并利用免疫荧光技术检测不同形状细胞中力学信号敏感分子YAP 入核情况，实验 结果表明沉默YAP 后，LC3B 点状物的数量减少，不同形状的细胞YAP 入核情况 不同。通过免疫荧光技术采集不同形状细胞的细胞核图片，并用matlab 分析细胞 核相关参数，可以发现在横纵比为1:4 的细胞中细胞核的横纵比、面积等参数的数 值都较低。通过免疫荧光技术检测HDAC3 在不同形状的细胞中核质分布情况，结 果发现 HDAC3 在横纵比为 1:4 的细胞中入核水平显著降低；用肌球蛋白抑制剂 Blebbistatin 处理后，利用免疫荧光技术检测 HDAC3 在不同形状的细胞中核质分 布情况，结果表明 HDAC3 的入核水平显著提高。紧接着用免疫荧光技术检测不 同形状的细胞中F-actin, Myosin Ⅱa 表达，用肌球蛋白抑制剂Blebbistatin 处理后， 利用免疫荧光技术检测细胞应力纤维的情况。结果发现，在横纵比为1:4 的细胞中 I 摘要 F-actin ，Myosin Ⅱa 表达水平显著提高。 综上所述，在形状是横纵比为 1：4 的细胞中，细胞收缩力较强导致HDAC3 核水平较低以及YAP 入核水平较高，自噬水平较高。说明细胞几何形状能够影响 肌球蛋白的收缩性，进而影响HDAC3 核转运，从而影响力学敏感分子YAP 的入 核水平，最终影响细胞自噬的水平。 关键词：细胞几何形状，肿瘤细胞，YAP ，自噬 II ABSTRACT ABSTRACT Cells are embedded in a highly structured microenvironment in which the extracellular matrix (ECM) and neighboring cells impose specific boundaries that can affect not only the structural and mechanical prop