病毒细胞受体SLAM在小反刍兽疫诊断中的应用研究.pdfVIP

摘 要 小反刍兽疫（Peste des petits rumminant ，PPR ）是一种严重影响小型反刍动物经济的病毒性 疾病，其主要感染动物的呼吸道和消化道。该病于 1942 年在西非象牙海岸（科特迪瓦）被首次 报道，由于其传播风险高，目前已有 43 个国家报道该病的发生，呈全球规模传播，因此小反刍 兽疫病毒Peste des petits ruminant virus ，PPRV ）抗原的特异性检测在该病病控制和根除中起着重 要作用。同时虽然山羊和绵羊是PPR 的主要宿主，但不断有研究证明大型反刍动物体内依然能检 测到PPRV 抗体的流行，给PPR 的有效控制和根除带来了潜在挑战。本研究首先以重组山羊SLAM （信号淋巴细胞活化分子，PPRV 细胞受体）为捕获分子，建立了一种间接ELISA 方法用于PPRV 抗原检测。本研究首先成功表达山羊SLAM 受体蛋白胞外区，并对包被缓冲液、封闭缓冲液、SLAM 蛋白包被浓度等参数进行了优化和标准化，结果表明该方法可特异性检测 PPRV ，而与口蹄疫病 毒、羊口疮病毒、绵羊痘和山羊痘病毒均无交叉反应，且灵敏度为 1.56×101TCID50/反应（50 μL ）。随后对136 份样品进行检测，结果表明所建立的PPRV SLAM-iELISA 方法与RT-qPCR 及 市售的PPRV 夹心ELISA 法均有很好的相关性，与上述两种方法相比，其相对灵敏度和特异性分 别为94.73%和 100.83%。以上结果表明该PPRV SLAM-iELISA 方法可用于PPRV 抗原的特异性 检测。 此外，本研究还调查了尼泊尔牛体内PPRV 抗体的流行情况。目前还没有尼泊尔相关地区牛 PPRV 抗体流行情况的监测，本研究从尼泊尔Rupandehi、Banke、Bara 和Chitwan 地区（上述地 区均报道有PPR 发生）共采集了255 份牛血清，用竞争ELISA 法检测血清标本，结果显示上述 地区牛PPRV 血清阳性率为5.88%，进一步表明PPRV 在该地区牛体内的流行。因此对家畜和野 生动物进行严格PPRV 的监测, 为PPR 的有效控制及净化具有重要意义。 本研究通过检测鼻拭子样本或临床样本，首次证明SLAM-iELISA 方法可用于PPRV 抗原的 特异性检测，为PPR 的净化提供理论依据和技术支持。 关键词：诊断，ELISA ，小反刍兽疫病毒，SLAM，血清阳性率 I Abstract Peste des petits ruminant (PPR) is an economically important severe viral disease of small ruminants that affects primarily respiratory and digestive tract. PPR was first reported in Ivory Coast (Cote d’Ivoire) of West Africa in 1942 and now the disease is spreading massively across the globe which has reached to 43 countries and the risk of spreading PPR is still high. Specific detection of PPR virus (PPRV) antigen plays an important role in the disease control and eradication program. In addition, although goat and sheep are the primary hosts of PPR, studies have continuously reported the prevalence of circulating antibodies in large ruminants, which could bring a