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生物科技行业轻工业微生物实验 指导书 实验壹培养基的制备和灭菌技术 壹、试验原理 马铃薯中含有淀粉、蛋白质、脂类及多种维生素经煮沸后可把这些营养成分从中溶出以供酵 母和霉菌生长需要，加入葡萄糖或蔗糖以补充微生物所需的碳源。此培养基为半合成培养基。 二、实验目的： 1 、掌握培养基的制备方法， 2 、学会高压蒸汽灭菌技术。 三、实验材料和仪器： 1 、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂。 2 、烧杯、漏斗、试管、三角瓶、量筒、玻璃棒、纱布、棉花、细绳、牛皮纸、试管架、 培养皿。 3 、手提式高压蒸汽灭菌锅、天平、电炉。 四、实验方法和步骤： （1）选无芽、无腐烂的马铃薯、洗净、削皮、称40g 切碎加水 200ml,放入 1000ml 烧杯中 煮沸 0.5hr 、冷却用纱布过滤去渣。 （2）在清液中加入4g 葡萄糖溶解补水至200ml ，此时到入壹试管10ml 。余下溶液加3.8g 琼脂加热熔化。 （3）试管分装：取玻璃漏斗装在漏斗架上，漏斗下连壹橡胶管，和玻璃管嘴相接，橡皮 管上夹壹弹簧夹，培养基倒入漏斗，通过弹簧夹控制培养基的流量。 （4）余下的培养基分装在俩个250ml 的三角瓶中。 （5 ）高压蒸汽灭菌：把溶解完的培养基用棉塞塞上且用牛皮纸把棉花包住，在 121℃， 0.1Mpa 下灭菌 20min 即可，灭菌时要注意放净阀气。取出灭菌物品时壹定要等到压力降到零 时打开灭菌锅盖。 （6）斜面摆放：将分装灭菌后的琼脂培养基试管置于水平放置的试管上，凝固后即成斜 面。 （7）培养皿培养基的倾倒：先用酒精棉球擦拭桌面及双手,在靠近酒精灯火焰的上方把冷 却到 45℃左右的培养基倒入培养皿内，每只倒入 15ml 左右。注意：温度太低培养基会凝固。 五、思考题： 1 ．培养基配制好后为什么要灭菌？ 2 ．蒸汽灭菌应注意几个问题？为什么？ 实验二微生物接种和无菌操作技术 壹、实验目的 1 、了解无菌操作在微生物接种过程中的重要性，掌握无菌操作的基本环节。 2 、掌握几种常用微生物的接种方法，为微生物的形态观察作准备。 二、实验材料 1 、菌种（1）细菌大肠杆菌（Escherichiacoli），枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis ）,(2) 酵母酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae ）,(3)霉菌黑曲霉（Aspergillusniger ） 2 、培养基 （1）肉汤培养基固体斜面培养基，液体培养基，半固体培养基，固体培养基。 （2）PDA 培养基液体培养基，斜面培养基，固体培养基。 3 、接种工具接种针，接种钩，接种环。 4 、酒精灯，标签纸，火柴，镊子，75%酒精棉球，试管架，电炉，铝锅，无菌平皿。 三、实验方法和步骤 1 、斜面接种用接种环在肉汤斜面培养基上划密波蜿蜒曲线接种大肠杆菌和枯草芽孢杆菌， 在 PDA 培养基斜面上用划直线和点接的方法分别接种酵母菌和霉菌。 2 、液体接种：用接种环在肉汤培养基液体中接种细菌，在PDA 液体培养基中接种酵母菌。 液体接种时取壹环菌苔，沿管壁轻轻擦下菌苔，塞上棉塞轻摇试管。 3 、穿刺接种：在肉汤培养基上接种细菌，在PDA 培养基上接种酵母菌。 4 、平板接种：分别在不同的培养基平板上点接不同的菌种。 四、结果记录 1 、斜面接种 （1）检查斜面接种情况、绘制斜面生长草图。 （2）分析斜面接种好坏的原因 （3）保留斜面、以便观察形态时使用。 2 、液体接种 观察记录细菌、酵母的液体培养特征，保留酵母液体培养液备用。 3 、穿刺接种 （1）检查穿刺接种效果，绘制草图。 （2）叙述不同微生物穿刺培养后的现象及原因。 （3）分析穿刺接种好坏的原因。 4 、平板接种 （1）检查平板接种的生长状况，有无污染（凡没接种地方长出菌落均为染菌）。 （2）描述各个菌落的特征。 实验三显微镜的使用、微生物观察和菌体大小测定 壹、实验原理 应月显微镜的成像原理，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，俩尺配合使用，进行 测量和运算，得出细胞的大小。 镜台测微尺系壹特制的载玻片（图 1－3），它的中央是壹具有刻度的标尺，全长为 1mm ，共 划分为 10 大格，每壹大格又分成 10 小格，每壹小格长 0.01mm ，即10um 。也有全长为2mm ， 共分 200 小格，每小格的长度不变。在标尺的外围有壹小黒环，以