食品理化检验 蛋白质和氨基酸的测定 任务六 蛋白质测定 3.ppt

LOGO * * 项目三 食品一般营养成分的测定 任务六 蛋白质与氨基酸 的 测 定 凯氏定氮法 —定容 将消化好并冷却至室温的试样消化液中小心加入20mL水，摇匀放冷，小心移入到100mL容量瓶中，再用蒸馏水少量多次洗涤凯氏烧瓶，并将洗液一并转入容量瓶中，直至烧瓶洗至中性，表明铵盐无损地移入容量瓶中，充分摇匀后，加水至刻度线定容，静置至室温，混匀备用。同样条件下做一试剂空白试验。 3）蒸馏 蒸馏 （1）水蒸汽发生器的准备：按要求安装好定N装置，保证管路密闭不漏气。在水气发生瓶内装水至2/3处，加甲基橙指示剂3滴，及1mL～5mL硫酸，以保持水呈酸性（防止水中含有N，加硫酸使成为（NH4）2SO4形式固定下来，使蒸馏中不会被蒸发），开通电源加热至沸腾。 蒸馏 蒸馏烧瓶，加有甲基红和硫酸的蒸馏水 反应室加有试样和氢氧化钠 蒸馏 蒸馏烧瓶，加有甲基红和硫酸的蒸馏水 反应室加有试样和氢氧化钠后的颜色 蒸馏 （2）清洗凯氏定氮仪：打开进气口，关闭废液出口，接通冷凝水，空蒸5min～10min，冲洗定N仪、样杯、碱杯和内室。分别关闭进气口（注意不要同时关闭所有进气口！），使废液自动倒吸于定氮仪外室，再由样杯加入少量水，冲洗再次，当废液全部吸入外室后，再放排液口，并使其敞开。 （3）吸收液准备 在250mL锥形瓶中加入10mL(20g/L)硼酸溶液及1滴～2滴混合指示液，放置冷凝器的下端，并使冷凝管下端插入液面下。 （4）蒸馏准备 准确吸取10mL试样处理液，由样杯加入定氮仪内室，并用10mL水冲洗样杯，但内室中溶液总体积不超过内室的2/3（约50mL），盖上棒状玻塞，加水至杯口1cm～2cm，以防漏气，关闭排队液口，迅速由碱杯加入10mLNaOH溶液（400g/L）（溶液应呈强碱性，注意内室颜色变化），通入蒸汽开始蒸馏。 蒸馏准备 注：NaOH必须充分，即在反应中是过剩的，保证消化液中的硫酸铵完全转变为氨气，故，Cu2SO4还可在碱蒸馏时作为碱性反应的指示剂： CuSO4+2NaOH（要充分）→Cu(OH)2（棕褐色）+Na2SO4 （5）蒸馏 关闭排液口，蒸汽进入反应室（内室），使NH3通过冷凝定而进入接收瓶被硼酸吸收，蒸馏5min（蒸至液面达约150mL），移开接收瓶，使冷凝管下端离开液面，让玻璃管靠在锥形瓶的瓶壁，出液口在200mL刻度线以上，继续蒸馏1min，蒸至液位达200mL。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。，将洗液一并聚集于硼酸溶液中，取下接收瓶。用蒸馏水冲洗冷凝管下端。 蒸馏 接收瓶，加有硼酸和指示剂 反应室加有试样和氢氧化钠 蒸馏 蒸馏装置 蒸馏 反应室 接收瓶 LOGO * *