流式细胞仪操作作业规程-SOP.docVIP

流式细胞仪操作规程目录 1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数 2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T检测 3：HLA-B27测定 4：CD55／CD59测定 5：干细胞检测和绝对计数 6：白血病免疫分型测定 7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定 8：细胞周期分析 9：活化血小板检测 10：血小板抗体测定 11：红细胞抗体测定 12：粒细胞抗体测定 淋巴细胞亚群测定 (流式细胞仪) 医院检验科 操作规程文件号： 200 年 月 日起实施 第1版 (共3页) 本规程每2年复审一次 复审日期： 年 月 日 复审人： 规程编写者： 审 批 者： 同意日期： 年 月 日 文件分发部门和／或个人 院档案室保管者： 检验科 主任： 检验科 试验室： 淋巴细胞亚群测定 方法 流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特) 原理： 双/三色/四色直接免疫荧光法。荧光素标识多种单克隆抗体加入到全血中，和白细胞膜上对应抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到淋巴细胞亚群百分数，加入Flow-Count即可得出绝对计数。淋巴细胞表面抗原分布以下：T淋巴细胞：CD3+；B淋巴细胞：CD3-，CDl9+；辅助性T淋巴细胞：CD3+CD4+；抑制性T淋巴细胞：CD3+CD8+；NK细胞：CD3-CDl6+56+等。依据淋巴细胞膜上CD分子表示不一样，流式细胞仪能够分辨出淋巴细胞及其多种不一样亚群，利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群百分数，加入Flow-Count组会自动得出绝对计数。 标本采集和处理 受检者准备 检验对象生活饮食处于日常状态。 采集部位 静脉采血 抗凝剂 EDTA或肝素抗凝血 要求 1．样本量1ml。 2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻或溶血标本不能用。 3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若10.0×109/L， 样本需要稀释，用PBS稀释；若4.0×109/L，应分离单个核细胞。 试剂 品牌 剂型 规格 贮存 贝克曼库尔特 成份 1：单克隆抗体 液体 2—8℃ (CD45/4/8/3 No.6607013 CD45/56/19/3 No.6607073 CD4/8/3 No.IM1650 同型对照IgG1/IgG1/IgG1 No.IM1672 CD3/19 No.IM1293 CD3/16+56 No.IM2076 CD19-PC5 No.IM2643 Flow-Count荧光微球 No.7547053) 2：全血溶血试剂(Q-Prep) 液体(No.7546946) A：甲酸 液体 70ML 室温 B：碳酸钠等 液体 32ML 室温 C：多聚甲醛 液体 14ML 室温 (Optilyse C No.IM1401) 液体 室温 3：鞘液(No.8546859) 液体 20L 室温 4：清洗液(No.8546930) 液体 5L 室温 5：荧光微球(No.6605359) 液体 10ML 2-8℃(Flow-Check) 仪器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra 样本制备： 1)根据要求，分别向已编好号试管中加入10/20 ul单克隆抗体和同型对照 2)分别向试管中加入混匀100u1抗凝血。 3)混匀，避光，室温孵育20-30分钟 4)溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血) b. 使用COULTER Q—PREP制备系统 开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---