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探析肝病中的细胞凋亡现象 摘要：细胞凋亡是通过正常的方式在多细胞生物中消除不需要的、衰老的和受 损的细胞，使机体细胞有丝分裂的速度与凋亡的速度相平衡。 认识肝病发生、发 展中细胞的异常凋亡有重要作用。 关键词：肺病；细胞凋亡；凋亡机制；检测 细胞凋亡是一个主动过程，是机体在生理或病理条件下受到刺激后，导致 细胞产生一系歹0形态和生化方面的改变而引起的程序性细胞死亡（ programmed cell death , PCD。 一、细胞凋亡机制与检测方法 凋亡机制 细胞凋亡的生化特点包括质膜磷脂排列方向改变、细胞内离子环境自稳改 变、蛋白酶和核酸内切酶激活分别致细胞蛋白质裂解和 DN/W裂、细胞内产生神 经酰胺、线粒体功能障碍、谷胱甘肽耗竭以及转谷氨酰胺酶激活。 参与引发细胞 凋亡的蛋白酶有多种，包括半胱氨酰天门冬氨酸特异蛋白酶家族成员和组织蛋白 酶等。特别是caspase家族成员与细胞凋亡关系最为密切，至少有 14种哺乳动 物caspase已获克隆，但仅对caspase-3和caspase-8的功能有所了解。 caspase-8在细胞凋亡中发挥启动作用；caspase-3在细胞凋亡中发挥效应作用。 由于各caspase可相互激活，所以caspase蛋白酶级联反应是导致细胞凋亡结构 改变的主要环节。线粒体功能障碍在细胞凋亡发生机制中起关键作用，能促进线 粒体功能障碍的因素很多，包括各种有害刺激和信号传递过程，其中某些配体 / 受体相互作用最为重要。配体与靶细胞表面受体相结合，就导致复杂的多蛋白复 合物形成，即将凋亡信号传递给效应蛋白酶 FLICE, FLICE与caspase-8相互反 应可激活caspase-8 , caspase-8激活后就通过某些不明的机制引发线粒体功能 障碍。线粒体功能障碍导致细胞色素 C释放，细胞色素C与凋亡激活因子-2相 结合，使caspase-3激活。caspase-3 乂激活DNA?t裂因子，导致静息状态的核 酸内切酶激活，最终引起DN/W裂。从线粒体功能障碍到DN醐裂，是细胞凋亡 生化途径的共同途径。在肝细胞凋亡发生机制中，以 Fas配体/Fas受体引发凋 亡信号级联反应研究得最多。此外，转化生长因子61及其受体、肿瘤坏死因子 及其受体在肝细胞凋亡发生机制中均起重要作用。 细胞凋亡的主要调节因子是 B 细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白家族的成员。Bcl-2 ,通过抑制凋亡以延长细胞存活 时间，是哺乳类动物细胞凋亡的一种强大抑制因子。 与Bcl-2关系密切的同源物 是Bcl-x，有两个RN/W接变种，长Bcl-X是较大的拼接变种，短Bcl-X是短拼 接变种。 检查方法 对细胞凋亡形态学的观察有 HE染色光镜观察以及电子显微镜、相差 显微镜、共聚焦激光扫描显微镜检查。 对DN心解片段的分析有琼脂糖凝胶电泳检测 DNA以及Southern Blotting 方法。 荧光标记膜蛋白V的检测。 流式细胞技术(FCM可以对活体或已固定的凋亡细胞进行定量分析。 末端脱氧核苜酸转移酶介导的脱氧尿苜三磷酸缺口末端标记术( TUNEL。 免疫组化。 二、肝中的细胞凋亡 近年来研究表明：肝细胞的死亡方式包括坏死和凋亡两种。凋亡在肝脏疾 病发展过程中的重要作用得到了人们的重视， 现将有代表性的几种肝脏疾病中的 凋亡现象分述如下 病蠹性肝炎。Fas系统介导的细胞凋亡在肝炎发生发展过程中起着重要作 用，在不同条件下，穿孔素、颗粒酶、 TNF-a、TGF-6等也参与了肝细胞的凋 亡。1998年Galle等报道乙型肝炎时肝细胞 Fas表达增强，致敏的细胞蠹性 T 细胞(CTD表达Fas配基(FasL), CTL经过免疫途径介导肝细胞凋亡，参与病 蠹的活理和肝炎的病理生理过程。若该反应过强，则可能诱发暴发性肝功能衰 竭。 肝纤维化。肝纤维化是慢性肝病共有的病理改变，有研究表明各种类型 的肝纤维化中都存在凋亡。肝星状细胞(HSC的激活是肝纤维化发生的中心环 节。1998年Gong^报道HS顷肌成纤维细胞(MFB的转变与sFasL介导的凋 亡增强相平行，Bcl-2和Bcl-XL在早期HSC±的表达高于晚期 HS胡日MFB Bax 则相反。这说明调节HSC的凋亡易感性在肝纤维化发生机制中起重要作用。 肝硬变。凋亡现象在肝硬变病例的肝细胞、 胆管细胞、单核细胞中普遍 存在。1999年Frommel等对照研究了正常肝组织、丙型肝炎和肝硬变标本，发 现对Bcl-2的表达逐渐增强，肝硬变患者中表达最强，提出了一种解释肝硬变患 者中肝癌高发生率的新机制。 肝癌。肝细胞癌形成过程中，不仅癌细胞异常增生，而且突变的细胞凋 亡减少，肝癌细胞对凋亡诱导反应明显缺陷，1998年Jodo等报道肝癌血活中sFas 水平升高，切除肿瘤后，sFas水平即下降。一些抑