靶向PCR CTC检测技术ppt参考课件.ppt

3mL血→6个小时→得到报告 检测流程 * * 肺癌领域，CTC检测技术对比 CytoploRare? （格诺） CellSearch? CyttelTM （北京莱尔） CanpatrolTM （益善） CTC-Biopsy? （武汉友之友) 核心技术 免疫磁珠负向富集 靶向配体PCR技术 流式正向富集技术荧光标记 免疫磁珠负向富集、 Fish技术 ISET（滤膜） 原位杂交RNA分析 ISET（滤膜) 荧光标记 特异性 88% 80% 83% 75% 70% 灵敏度 80% 30% 腺癌：46% 30% 30% 自动化 半自动 全自动 半自动 半自动 全自动 血样体积 3mL 7.5mL 4mL 5mL 10mL 适应症 早、中和晚期肺癌 晚期乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌 晚期肺癌、胰腺癌、乳腺癌 晚期癌肿 晚期癌肿 早期（I期）敏感性 67% 0% 20%(2/10) 未报道 未报道 中晚期敏感性 89% 25%（22/87) 61%-88% 30% 40% 报告时间 6h/12样本 6h/8样本 48h/1样本 48h/1样本 3天 可视化 否 是 是 是 是 不同CTC计数对于肺癌诊断的特异性与敏感性 CTC计数 诊断肺癌敏感性 诊断肺癌特异性 2.0 99.5% 2.3% 4.0 96.1% 21.3% 6.0 89.5% 44.8% 8.7 78.0% 83.6% 10.0 68.1% 90.3% 12.0 54.1% 95.2% 14.0 40.1% 97.6% 16.0 27.6% 98.1% 18.0 20.5% 98.6% 20.0 16.2% 99.5% * * CTC对肺癌的诊断显著优于一般肿瘤标志物 辅助诊断 指标 AUC值 P值 CTC 0.91 P0.0001 CEA 0.56 NSE 0.61 CYFRA21-1 0.71 SCCA 0.49 CTC与一般肿瘤标志物对肺癌诊断的准确性（AUC值） * * 爱普 * 靶向PCR CTC检测技术 ——帮助临床医生更全面地评估肺癌 * * Lung Cancer in Solid Tumor in China * * = ？ 液态活检 通过外周血中的肿瘤细胞或者肿瘤基因组信息来评估肿瘤 病理活检 通过原发灶肿瘤组织来评估肿瘤 CTC ctDNA mircoRNA LNC RNA Others 传统的组织细胞学检测 液态活检在肺癌中的应用 治疗策略 事件 肺癌待查 辅助诊断 早癌肺癌 晚期肺癌 癌症耐药 复发监测 治疗方案选择 疗效评估 耐药机理 新药研发 治疗策略 事件 疑似肺癌 辅助诊断 早癌肺癌 晚期肺癌 癌症耐药 复发监测 治疗方案选择 耐药机理 新药研发 CTC的临床应用价值 疗效评估 CTC(数量） (负向富集+靶向PCR） ctDNA (基因变异） * * 1、K. Pantel, et al. Nat Rev Clin Oncol, 2009;2、K. Pantel and MR. Speicher, Oncogene 2015 什么是循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC）？ 肿瘤释放如外周血中CTCs数量的多少，可间接反应肿瘤发生发展的功能状态 CTC：在肿瘤发生过程中，具有干细胞特征的肿瘤细胞和不具有干细胞特征的肿瘤细胞，均由原发肿瘤脱落释放入外周血，两者统称循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell）CTC1 CTC≠有转移：侵入第二器官CTCs，称之为DTC（disseminated Tumor Cell），只有由具有干细胞特征的DTC所形成的微转移灶，逃避免疫识别才可能发展成为肿瘤远处转移2 第9周的乳腺管组织切片：乳腺管周围非典型性增生 第30周的肿瘤组织切片：新生的肿瘤上皮细胞形成牙槽并侵袭周围基质 CK+ cells HER-2+ cells 什么时候可以检测到CTC？ 早期肿瘤外周血中即可检出CTC W He, et al. Proc Natl Acad Sci, 2007 早期肿瘤外周血中即可检出CTC 表达中等量FR的M109鼠肺癌细胞通过皮下注射的方式被移植到BALB/c小鼠的背部侧面 移植2周后，在小鼠耳部的血管中每分钟可以检测到大约1.4个CTC细胞 移植后第3和第4周，则每分钟可分别检测7个和18个CTC，随着肿瘤逐渐增大数量呈指数上升 在肿瘤移植的前4周内，没有在任何组织切片中发现到存在转移性癌症的迹象 CTC富集技术 密度与大小 免疫磁珠（负向富集 or 阳性富集) 微流体 CTC检测方法 CTC检测技术 靶向PCR 免疫荧光 普通PCR = + “方法” “收获” “垃圾” 蟹饵 没水了， 我们躲不了了 放 水