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752015 年药典 通则 1105 非无菌产品微生物限度检 通则 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数；微生物计数法系用于 能在有氧条件下生长的嗜温细菌和；微生物计数试验环境应符合微生物限度检 查的要求；如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和；供试液制备时如果使 用了表面活性剂，应确认其对微生；计数方法；计数方法包括平皿法、薄膜过 滤法和最可能数法（ Mo；供试品检查时 , 应根据供试品理化特性和微生物限度标； 计数培养基适用 通则 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 当本 法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应 按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，本 法不适用于活菌制剂的检查。 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全过程必须严格 遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。 如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时 , 若使用了中 和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所 使用中和剂或灭活剂的相容性。 计数方法 计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（ Most-Probable-Number Method，简称 MPN法 ）。 MPN法 用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微 生物污染量很小的供试品， MPN法 可能是更适合的方法。 供试品检查时 , 应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方 法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。 所选方法的适用性须经确认。 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。 供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适 合于该产品的微生物计数。 若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适 用性试验。 表 1 试验菌液的制备和使用 注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基 适用性检查，检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基。 菌种及菌液制备 菌种 试验用菌株的传代次数不得超过 5 代（从菌种保藏中心获得的干燥 菌种为第 0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生 物学特性。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表 1。 菌液制备 按表 1 规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假 单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用 pH7.0 无菌氯化钠 - 蛋 白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培 养物加入 3～5ml 含 0.05 ％聚山梨酯 80 的pH7.0 无菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无 菌试管内，用含 0.05 ％聚山梨酯 80 的 pH7.0 无菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液或 0.9% 无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。菌液制备后若在室温下放置， 应在 2 小时内使用；若保存在 2～8℃，可在 24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液 可保存在 2～ 8℃，在验证过的贮存期内使用。 阴性对照 为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验， 阴性对照试验应无 菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。 培养基适用性检查 微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进 行培养基适用性检查。 按表 1 规定，接种不大于 100cfu 的菌液至胰酪大豆胨液体培养基管或胰 大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置表 1 规定条件下 培养。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替 代被检培养基进行上述试验。 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在 0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养 基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。 计数方法适用性试验 ⒈ 试液制备 根据供试品的理化特性与生物学特性 , 采取适宜的方法制备供试液。供试液 制备若需加温时 ,应均匀加热 ,且温度不应超过 45℃。供试液从制备至加入检验 用培养基 , 不得超过 1 小时。 常用的供试液制备方法如下。如果下列供试液制备方法经确认均不适用， 应建立其他适宜的方法。 ⑴ 水溶性供试品 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠 - 蛋白胨缓冲液，或 pH7. 2 磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养