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现代分子生物学试题及答案 现代分子生物学习题及答案 一、填空题 1． 基因工程是 70 年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2． 基因工程的两个基本特点是： (1)分子水平上的操作 ， (2)细胞水平上的表达 3． 基因克隆中三个基本要点是： 克隆基因的类型 ；受体的选择；载体的选择 4． 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定 基因区域所得到的不同大小 的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的 限制性酶切图谱。 5． 限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名 的，第一个大写字母取自 属名的第一个字母 ，第二、三两个 字母取自 _种名的前两个字母 ，第四个字母则用 株名 表示。 6．部分酶切可采取的措施有： (1)减少酶量； (2)缩短反应时 间； (3)增大反应体积等 。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是 EcoK ；而第一个用于 构建重组体的限制性内切核酸酶是 _ EcoRl 。 8．限制性内切核酸酶 BsuRI 和 Hae Ⅲ的来源不同，但识别 的序列都是 GGCC ，它们属于 异源同工酶 。 9．DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用 _枯草杆菌蛋白酶 切 割 DNA 聚合酶 I 得到的分子量为 76kDa 的大片段，具有两种酶活性： (1) 5-3 合成酶的活性 ； (2) 3-5 外切核酸酶 的活性。 10．为了防止 DNA 的自身环化，可用 碱性磷酸酶 去双链 DNA_ 5’端的磷酸基团 。 11． EGTA 是 _Ca2+_ 离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，它只有 _ 5-3 合成酶的活性，而没有 3-5 外切 酶的活性。 13．切口移位 (nick translation) 法标记 DNA 的基本原理在于利用 DNA 聚合酶 I 的 __5 一 3 外切核酸酶 和 5 一 3合成酶的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA 分子转变成平末端的双链形式， 通常可采用 ____ S1 核酸酶切割 或 DNA 聚 合酶补平 。 15．反转录酶除了催化 DNA 的合成外，还具有 __核酸水解酶 H 的作用，可以将 DNA- RNA 杂种双链中的 _RNA_ 水解掉。 16．基因工程中有 3 种主要类型的载体： 质粒 DNA ，病毒 DNA ，质粒和病毒 DNA 杂合体 。 17．就克隆一个基因 (DNA 片段 )来说，最简单的质粒载体也 必需包括三个部分： __复制区： 含有复制起点； 选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源 DNA 的插入 。另 外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18． 一个带有质粒的细菌在有 EB 的培养液中培养一段时 间后，一部分细胞中已测 不出质粒，这种现象叫 质粒消除 (或治愈 ) 。 19． pBR322 是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 pMBl ，它的四环素抗性基 因来自于 pSCl01 ，它的氨苄青 霉素抗性基因来自于 pSF2124(R 质粒 )。 20．YAC 的最大容载能力是 1000kb ，BAC 载体的最大容载 能力是 300kb 。 21． pSCl01 是一种 严紧 复制的质 粒。 22．pUCl8 质粒是目前使用较为广泛的载体。 pUC 体是通过 pBR322 和 M13 两种质粒改造而来。它的复制 pMBl ， Amp  系列的载子 来 自 抗性基因则是来自 转座子。 23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原 因：一是 它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源 DNA 的扩增 ； 二是 对某些噬菌体 (如 噬菌 )的遗传结构和功能研究得比较清楚， 其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽。 24． 野生型的 M13 不适合用作基因工程载体，主要原因是 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点 和 选择标记 。 25． 黏粒 (cosmid) 是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子 26． 是：  来自质粒 、 COS 位点序列来自 噬菌体 ，最大的 克隆片段达到 45 kb 。 野生型的 噬菌体 DNA 不宜作为基因工程载体， 原因 (1) 分子量大， (2) 酶的多切点， (3)无选择标记 27．噬菌粒是由质粒和噬菌体 DNA 共同构成的，其中来自 质粒的主要结构是 复制区 ，而来自噬菌体的主要结构是 IG区 。 28． 噬菌体载体由于受到包装的限制， 插入外源 DNA 片段 后，总的长度应在噬菌体基 因组的 75％～ 105％ 的范围内。 29． 在分离 DNA 时要使用金属离子螯合剂，如  EDTA  和 柠檬酸钠等，其目的是 螯合 Mg 2+离子，抑制核酸酶的活性 。 30． 用乙醇沉淀 DNA 时，通常要