分子生物学课件 第十章RNA-1.pptVIP

miRNA的功能 调节细胞早期的发育 控制植物叶片的形态建成 调控基因的表达 参与细胞分化和组织发育 miRNA与人类疾病 miRNA 与杜-阿二氏肌萎 miRNA 与癌症之间的相关性 miRNA与siRNA的相同点 相同点/联系点 siRNA miRNA 长度及特征 都约在22nt左右，5’端是磷酸基，3＇端是羟基 合成的底物 miRNA和siRNA合成都是由双链的RNA或RNA前体形成的 Dicer酶 依赖Dicer酶的加工，是Dicer的产物，所以具有Dicer产物的特点 作用方式 都可以阻遏靶标基因的翻译，也可以导致mRNA降解，即在转录水平后和翻译水平起作用 进化关系 可能的两种推论：siRNA是miRNA的补充，miRNA在进化过程中替代了siRNA miRNA与siRNA的不同点 不同点/分歧点 siRNA miRNA 机制性质 往往是外源引起的，如病毒感染和人工插入dsRNA之后诱导而产生，属于异常情况 是生物体自身的一套正常的调控机制 直接来源 长链dsRNA 发夹状pre-miRNA 分子结构 siRNA是双链RNA，3‘端有2个非配对碱基，通常为UU miRNA是单链RNA 对靶RNA特异性 较高，一个突变容易引起RNAi沉默效应的改变 相对较低，一个突变不影响miRNA的效应 作用方式 RNAi途径 miRNA途径 生物合成，成熟过程 由dsDNA在Dicer酶切割下产生;发生在细胞质中 pri-miRNA在核内由一种称为Drosha酶处理后成为60nt的带有茎环结构的Precursor miRNAs (pre-miRNAs)；这些pre-miRNAs在转运到细胞核外之后再由Dicer酶进行处理，酶切后成为成熟的miRNAs；发生在细胞核和细胞质中 互补性 一般要求完全互补 不完全互补，存在错配现象 重要特性 高度特异性 高度的保守性、时序性和组织特异性 作用机制 单链的siRNA结合到RISC复合物中，引导复合物与mRNA完全互补，通过其自身的解旋酶活性，解开siRNAs，通过反义siRNA链识别目的mRNA片段，通过内切酶活性切割目的片段，接着再通过细胞外切酶进一步降解目的片段。同时，siRNA也可以阻遏3′UTR具有短片断互补的mRNA的翻译。 成熟的miRNAs则是通过与miRNP核蛋白体复合物结合，识别靶mRNA，并与之发生部分互补，从而阻遏靶mRNA的翻译。在动物中，成熟的单链miRNAs与蛋白质复合物miRNP结合，引导这种复合物通过部分互补结合到mRNA的3′UTR（非编码区域），从而阻遏翻译。除此之外，miRNA也可以切割完全互补的mRNA。 对RNA的影响 降解目标mRNA；影响mRNA的稳定性 在RNA代谢的各个层面进行调控；与mRNA的稳定性无关 作用位置 siRNA可作用于mRNA的任何部位 miRNA主要作用于靶标基因3′-UTR区 生物学意义 siRNA不参与生物生长，是RNAi的产物，原始作用是抑制转座子活性和病毒感染 miRNA主要在发育过程中起作用，调节内源基因表达 核糖开关(riboswitches)和反义核酸(anti-sense RNA) 核糖开关（riboswitches）指的是mRNA一些非编码区的序列折叠成一定的构象，这些构象的改变应答于体内的一些代谢分子，从而通过这些构象的改变达到调节mRNA转录的目的。 反义RNA 是指与mRNA 或DNA 互补的小型单链RNA 分子,其长度一般不到200 个核苷酸,将它导入靶细胞后,可形成DNA/ RNA 或mRNA/ RNA 杂交双链,从而抑制基因表达,达到基因抑制的目的。 RNA研究前景 基因组非蛋白编码区蕴含着重要的生命功能活动信息，对此我们知之甚少。 通过实验RNA组学和生物信息学的方法得到的新的非编码RNA是否具备生物学功能以及具备什么样的生物学功能现在还是未知的。 科学界关于新发现的这么多非编码RNA到底是hope（希望）还是hype（欺骗）尚存在争论。 核糖开关（riboswitches）指的是mRNA一些非编码区的序列折叠成一定的构象，这些构象的改变应答于体内的一些代谢分子，从而通过这些构象的改变达到调节mRNA转录的目的。 　　一：核糖开关的结构 　　核糖开关主要由两部分组成，分别是感受外界配体的适体域（aptamer domain AD）和调控基因表达的结构域-表达平台（expression plateform EP），两部分的作用机理可简单叙述为，配体同适体域特异性地结合，引起适体域构象的变化，从而影响到表达平台构象的变化，进而调控基因的表达。 　　二：核糖开关的调控机制 　　1：转录水平的调控 ：主要是控制终止子和抗终止子的形成，达到调控的目的