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组织病理切片的制作过程 1 .取材组织取材的法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要 求取自人体(外科手术切除标本、活检标本、尸检标本)或动物，并确定取材的部位和 法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术， 每个组织器官的取材都有一定的部位和法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无 法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： 材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅 速固定，以保证原有的形态学结构。 组织块的大小：所取组织块较理想的体积为 2.0cm x 2.0cm x 0.3cr^使固定液 能迅速而均匀地渗入组织部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同， 如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取 0.1?0.2cm即可，这样可以缩短固定 脱水透明的时间，若制作教学切片厚取 0.3?0.5cm ,这样可以同一蜡块制作出较多的 教学切片。 勿挤压组织块：切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回理动。夹取组织时 切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 规取材部位：要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的 不同，根据要求规化取材。 选好组织块的切面：根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往 是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 保持材料的活洁：组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干 净后再放入固定液中。 保持组织的原有形态：新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全 变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 固定 小块组织固定法：这是最常用的法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置 入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为 1:4?20,但组织块不宜过大 过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为 2.0cm x 2.0cm x 0.3cm 注射、灌注固定法：某些组织块由丁体积过大或固定液极难渗入部，或需要对整 个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管， 经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。 ⑶蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用饿酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片， 则应在血片未干燥前采用饿酸或甲醛蒸汽接触固定。 最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。 3 .脱水透明标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的水分，必须将组织块的水分 置换出来，这一过程叫做脱水。无论是用蜡切片，还是用火棉胶切片，都必须除去组织 中所含水分，因含水组织与蜡、火棉胶等包埋材料不相容，常用的脱水剂为一系歹0不同 浓度的乙醇。 脱水的步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水 机自控完成。 丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂，但因其脱水能力很强，对组织有剧烈收缩作 用，在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙酮等不溶丁蜡，还要经过一 个能溶丁蜡的溶剂替代过程称为透明。 常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水酸甲酯等。 浸蜡、包埋 使蜡浸入组织中，取代组织中含有的透明剂。 包埋：将浸蜡后的组织置丁融化的固体蜡中，蜡凝固后，组织即被包在其中，称 蜡块，此过程称为包埋。 切片和贴片 修整蜡块：可视其组织的大小，在组织边缘约 0.1?0.2cm处，切去余蜡部分， 否则易造成组织皱缩不平。 准备好切片用具：切片刀、毛笔、眼科镶子(弯)、漂烘温控仪 安装蜡块：将修好的蜡块安装在金届或木制持蜡器上。 安装切片刀：将切片刀安装在切片机的刀台上，把刀台上的紧固螺丝旋紧，使切 片时不广生振动，能保持一定的切片厚度。 切片的厚度：切片机的厚度调节器上刻有 0?50 pni或0?25 [1 m,可任意选择其 厚度，蜡切片的厚度一般在4?6 m。 切片 铺片：用眼科镶子镶起蜡带轻轻平■铺在 40?45 C的水面上，借水的力和水的温 度，将略皱的蜡带自然展平。 贴片、烘片：待切片在包温水面上充分展平后，将蜡片捞到载玻片的中段处倾去 载玻片上的余水，置入60?65C包温箱或切片漂烘温控仪的烘箱烤片 15?30分钟， 脱去溶化组织间隙的蜡。 6 .染色和封片常用的染色法是木素-伊红(Hematoxylin-Eosin )染色法，简称H.E 染色法。这种法对任固定液固定的组织和应用各种包埋法的切片均可使用。木素是一种 碱性染料，可使组织中的嗜碱性物质染成蓝色，如细胞核中的染色质等；伊红是一种酸性 染料，可使组织中的嗜酸性物质染成红色，如多数细胞的胞质、核仁等在 H.E染色的切 片中均呈红色。 H.E染色程序如下：脱蜡、脱苯、复水、染色、脱水、透明、封固 常规木素染色中的对比染色是用伊红，近年来在英、