精选幻灯片2色谱法概论.ppt

第二章 色谱法原理 （ Principles of chromatography ） 1 概述 色谱法早在 1903 年由俄国植物学家 Цвет( 茨维特 ) 分离植物色素 时采用。 1941 年，英国生物学家 Martin （马丁）和 Synge （辛格）大胆 提出了气液色谱的设想，并于 1952 年提出了塔板理论，开创了色谱 发展的新纪元。正由于他们在色谱学和生物化学领域作出的重大贡 献，因而获得了 1952 年的诺贝尔化学奖。 1956 年，荷兰学者范第姆特（ Van Deemter ）总结了前人的 经验，提出了反映载气流速和柱效关系的范第姆特方程式，建立了 初步的色谱理论。 我国科技工作者，早在 1956 年就开展了气相色谱法的研究工 作， 1958 年，我国的第一台气相色谱仪研制成功。 1 2. 色谱法分类 不管属于哪一类色谱法，其共同的基本特点是具备两 个相： 不动的一相，称一为固定相；另一相是携带样品流 过固定相的流动体，称为流动相 。 当流动相中样品混合物 经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性 质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有 差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相 滞 留 时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 2 一 . 按两相状态分类 气体为流动相的色谱称为 气相色谱（ GC ）， 根据固定相 是固体吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化 合物液体），又可分为气固色谱（ GSC ）和气液色谱（ GLC ）． 液体为流动相的色谱称 液相色谱（ LC ） 。同理，液相色谱 亦可分为液固色谱（ LSC ）和液液色谱（ LLC ）． 超临界流体为流动相的色谱称为 超临界流体色谱（ SFC ）。 通过化学反应将固定液键合到载体表面，这种化学键合固 定相的色谱又称 化学键合相色谱（ CBPC ）。 3 二．按分离机理分类 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以 分离的方法，称为 吸附色谱法 。 利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方 法称为 分配色谱法 。 利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达 到分离的方法，称为 离子交换色谱法 。 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离 的方法，称为 凝胶色谱法 或尺寸 排阻色谱法 。 最近，又有一种新分离技术，利用不同组分与固定相（固定 化分子）的高专属性亲和力进行分离的技术称为 亲和色谱法 ，常 用于蛋白质的分离 4 三．按固定相的外形分类 固定相装于柱内的色谱法，称为 柱色谱 。固定相呈平板状 的色谱法，称为 平板色谱 ，它又可分为 薄层色谱 和 纸色谱 。 根据以上所述，将色谱法的分类总结于下表中。 5 6 3. 色谱流出曲线及有关术语 一．流出曲线和色谱峰 7 如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线的线性范围内， 色谱峰如果对称，可用 Gauss 正态分布函数表示： 式中 C ：不同时间 t 时某物质的浓度， C 0 ：进样浓度， t r ：保 留时间， σ ：标准偏差。 ] ) ( 2 1 ex p[ 2 2 0 ? ? ? r t t C C ? ? ? ? 8 二、基线 (baseline) 是柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值， 即图中 O — t 线．稳定的基线应该是 一条水平直线 。 三、峰高 (peak height) 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以 h 表示，如图中 B′A 。 9 四、 保留值 (retention value) 1 ．死时间 t M ( dead time) 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样 到出现峰极大值所需的时间称为死时间，如图中 O ′ A ′ 。因 为这种物质不被固定相吸附或溶解，故其流动速度将与流 动相的流动速度相近．测定流动相平均线速 ū 时，可用柱 长 L 与 t M 的比值计算。 m t L u ? 10 2 ．保留时间 t R （ retention time) 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的 时间，称为保留时间，如图中 O ′ B ．它相应于样品到达 柱末端的检测器所需的时间 。 11 3 ． 调整保留时间 t R （ adjusted retention time ) 某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留 时间，即： t R ′ = t R -t M 4 ．死体积 V M ( dead volume) 指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、 色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总 和．当后两项很小而可忽略不计时，死体积可由死时间与流 动相体积流速 F 0 （ L ／ min ）计算： V M = t M · F 0