生物化学实验复习总结计划题.docx

生物化学实验复习题： 1. 2.  试述旋光法测定淀粉含量的实验原理。 在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷 物淀粉的比旋光度是不同的。其在 171～ 195 之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。 3. 4. 5. 6. 7.  淀粉含量测定的方法有几种比较各方法特点。 淀粉是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，测定淀粉的方法主要有酸水解法、酶水解法和旋 光法等。 1、酸水解法：面粉经乙醚除去脂肪，乙醇除去可溶性糖类后，用酸水解淀粉为葡萄糖， 按还原糖测定方法测定还原糖含量，再折算为淀粉含量。 2、酶水解法：面粉经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用 盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。 3、旋光法：在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条 件下，不同面粉淀粉的比旋光度是不同的。其淀粉的比旋光度在 171~195 之间，因此可 用旋光法测定淀粉的含量。 8. 9.  简述旋光法测定淀粉的关键步骤。 1.样品的处理 在电子天平上称取小麦粉置于三角瓶中→ 加入 50ml 1%HCl 混成浆状 （不能有结块） → 沸水浴中 准确加热 15min →先加 1ml 30% ZnSO4 混匀→再加 1ml 15% 亚铁氰化钾混匀→ 移至 100ml 容量瓶中加水定容混匀后过滤→弃去最初 15ml 收集其余滤液。 2.旋光度测定 取滤液 20ml 置于旋光管中， 先用 1%HCl 调节旋光仪“ 0”点，然后将样品溶液放入旋 光仪中测α 10.写出计算粗淀粉含量的公式并说明各符号的含义。 11. 12.试述凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理。 13.含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮 则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解， 游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无 机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止， 最后根据所用标准酸的摩尔数 （相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。 14.蛋白质含量测定的方法有几种比较各方法特点。 ①染料法，该法近年在某些方面有取代经典的 Lowry 法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料 -蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨 基酸组成有较大差异的蛋白质， 有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。 双缩脲 (Biuret) 法，此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干 扰物质少。 主要的缺点是灵敏度差。 因此双缩脲法常用于快速， 但并不需要十分精确的 蛋白质测定。 酚试剂法 (Lowry) 法及紫外吸收法双缩脲法操作简单，线性关系好，但灵敏度差，样品需要量大，测量范围窄，因此在科研上的应用受到限制；而酚试剂法弥补了它的缺点，因而在科研中被广泛采用，但是它的干扰因素多； ②定氮法 ,双缩尿法（ Biuret 法）、 Folin －酚试剂法（ Lowry 法）和紫外吸收法 .考马斯亮蓝法（ Bradford 法） . 凯氏定氮 灵敏度低 ,适用于氮 ,误差为 ±2％ 费时 10 小时 将蛋白氮转化为氨 ,用酸吸收后滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离） 用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长 双缩脲法（ Biuret 法） 灵敏度低 20mg 中速 20~30 分钟 多肽键＋碱性 Cu2＋ ? 紫色络合物 硫酸铵； Tris 缓冲液；某些氨基酸 用于快速测定 ,但不太灵敏；不同蛋白质显色相似 紫外吸收法 较为灵敏 50～ 100mg 快速 10 分钟 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在 280nm 处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶； Folin －酚试剂法（ Lowry 法） 灵敏度高 5mg 慢速 40～60 分钟 双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被 Tyr 和 Phe还原 硫酸铵； Tris 缓冲液；甘氨酸； 各种硫醇 耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化 考马斯亮蓝法 (Bradford 法 ) 灵敏度最高 5mg 快速 5～ 15 分钟 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时 ,其 lmax 由 465nm 变为 595nm 强碱性缓冲液； SDS 最好的方法；干扰物质少；颜色稳定； 颜色深浅随不同蛋白质变化 15.简述凯式定氮法测定蛋白质的关键步骤。 16. 置于凯氏试管 底部 →加混合混合催化剂和 3ml 1、消化：在电子天平上称取小麦粉 浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（ 2h 左右）取出放入通风橱内至 不冒白 烟，向其