2020第三章酶的生物合成.ppt

一、 产酶微生物的工业化要求及安全性 1 、产酶微生物的工业化生产条件 2 、产酶微生物的安全性要求 1 、 产酶微生物的工业化生产条件 ? 产酶量 高 ，酶的性质符合要求，而且最好是分泌 型的 胞外酶 ，以便于酶的提取 ? 产酶菌不能是 致病菌 ，在系统发育上与病原体无 关，不产生 毒素 ? 菌株稳定，不易 变异退化 ，不易感染噬菌体 ? 能利用廉价原料，发酵周期 短 ，易于培养，易于 提取 ? 基因工程菌株必须符合安全性要求 2 、 产酶微生物的安全性要求 ? 酶制剂生产时需通过安全检查 ? 医药和食品酶制剂需进行毒性试验 ? 尚未在法规机构 GRAS( 公认为安全的 ) 的食 品生产或加工的清单中的微生物，需申请 许可证 申请许可证须包括以下资料： ? 酶及其来源微生物的描述 ? 酶制备方法 ? 酶制剂的组成 ? 酶或微生物的毒理数据 酶制备方法： 培养基的完全组成；生产设备；发酵条件 ( 通气、 搅拌、温度等 ) 单一酶、复合酶或是整个细胞 杂质如重金属、溶剂痕迹或来源于生产过程中的其他化学物质 用于分析组成和杂质浓度的分析方法的细节 微生物必须是非致病性的 微生物一定不能产生真菌素或其他毒性化合物 微生物一定不能产生抗生素 二、 微生物酶的发酵生产 1 、酶的发酵生产方法 2 、培养基的配制 3 、种子培养 4 、微生物发酵产酶的一般工艺 1 、 酶的发酵生产方法 (1) 固体培养法 (2) 液体培养法 1 、酶的发酵生产方法 (1) 固体培养法 ? 麸皮、米糠 + 其他成分 固体或半固体培 养基 灭菌 发酵 ? 优点：设备简单；操作方便；酶浓度高；适于 霉菌培养 ? 缺点：劳动强度大；原料利用率低；生产周期 长；规模小 1 、酶的发酵生产方法 (2) 液体培养法 ? 将液体培养基置于发酵容器中，经灭菌、冷却 后接入菌株进行发酵 ? 目前酶发酵生产的主要方式 ? 适于微生物，植物、动物细胞及工程菌的发酵 ? 优点：机械化强度高；易于管理控制；生产效 率高、质量好；规模大 2 、 培养基的配制 配制原则 ? 营养丰富，浓度恰当 ? 各组分理化性质稳定，不互相反应 ? 黏度适中，有适当的渗透压 ? 所用原料利于目的产物的生物合成 ? 不影响通气和搅拌，不影响产物的分离精制和 底物处理 ? 原材料因地制宜、质优价廉、成本低 3 、种子培养 ? 又称种子制备，是指将处于休眠状态的生产菌 种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及 种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量纯 种的过程，它是发酵的第一道工序 ? 提供产量高、性能稳定、数量足且无杂菌污染 的生产种子 ? 从培养基、培养条件、种龄和接种量等方面控 制种子质量 4 、微生物发酵产酶的一般工艺 试管菌种培养 茄瓶菌种培养 孢子 ( 菌体 ) 悬液制备 种子罐菌种培养 发酵罐发酵 发酵液预处理 酶的分离纯化精制 摇瓶菌种培养 三、 发酵的影响因素及其控制 1 、 温度 2 、 pH 3 、 溶解氧 4 、 基质浓度 5 、 泡沫 6 、 发酵终点判断 1 、 温度 ? 影响酶催化反应速度和蛋白质性质；影响发酵液 的物理性质 ( 如黏度、基质和氧的溶解度和传递速率、 基质的分解和吸收速率等 ) ? 细菌发酵产酶的最适温度往往低于最适生长温度 控制： ? 在不同发酵产酶阶段控制不同的温度条件 ? 控制方法：热水升温；冷水降温 2 、 pH ? 影响酶蛋白的解离度和电荷情况，改变酶的结构和功能， 引起酶活性的改变 ? 影响细胞对基质的利用速度和细胞的结构，以至影响菌 体的生长和产物的合成 ? 影响细胞