生物制药与药品检验技术 蛋白质类药物含量测定“三巨头” 课件：蛋白质类药物含量测定“三巨头”.pptxVIP

;项目一 血清蛋白类药物的原料制备与分析检验;蛋白质药物含量测定“三巨头”;学习内容： （1）双缩脲法 （2）福林-酚法 （3）紫外吸收法 学习重点： 不同方法的适用对象;1. 基本原理;碱性;2）福林-酚试剂法 （Folin phenol method） 双缩脲法的发展 碱性，蛋白质-铜离子、酪氨酸和色氨酸残基还原磷钼酸-磷钨酸试剂（福林试剂），深蓝色 750nm测定：蛋白质浓度范围为0.03~0.3g/L 500nm测定：蛋白质浓度范围为0.05~0.5g/L;3）紫外吸收法 （Ultraviolet（UV） absorption method） 蛋白质，酪氨酸和色氨酸，共轭双键，吸收紫外光 （absorb ultraviolet light ），280nm，光吸收值与其浓度呈正比关系;2.不同方法的优缺点;2）福林-酚试剂法 优点： 比双缩脲法灵敏 缺点： 费时 含酪氨酸、色氨酸残基与标准蛋白差异较大，误差 标准曲线线性较差 已知干扰因素（如：高浓度硫酸铵） ;操作注意： 福林试剂（试剂乙），酸性条件下，稳定，反应却只在pH10发生 福林试剂，加到碱性铜（试剂甲）与蛋白质溶液中，必须立刻混匀，在福林试剂被破坏前，反应即能发生;3）紫外吸收法 优点： 快速、简便，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定 缺点： 1）测定与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差 2）样品中含有核酸等吸收紫外光的物质，较大干扰 ;3.适用对象 ;2）福林-酚试剂法 适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定 对含这两种残基与标准蛋白质差异较大的，有误差;3）紫外吸收法 已在蛋白质和酶enzyme的生化制备中广泛应用 （It has been widely used in the biochemical preparation of proteins and enzymes.） 适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质 ;总结：蛋白质类药物含量测定“三巨头”