龙眼AGO10基因的分离克隆及其表达研究-基因工程论文-生物学论文.docxVIP

龙眼AGO10基因的分离克隆及其表达研究-基因工程论文-生物学论文 ——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印—— 　　摘 要：　【目的】探究龙眼胚性愈伤组织Argonaute10(AGO10)基因的特性与龙眼生长发育、激素响应及非生物胁迫响应之间的关系。【方法】根据龙眼胚性愈伤组织转录组数据库Unigene序列，采用RT-PCR结合RACE技术，以红核子龙眼胚性愈伤组织cDNA为模板，进行龙眼胚性愈伤组织DlAGO10基因的克隆和生物信息学分析，同时利用qRT-PCR技术分析DlAGO10基因在龙眼体胚发生过程中、不同组织部位中、对不同激素的响应以及非生物胁迫响应的表达情况。【结果】获得龙眼DlAGO10基因的cDNA全长序列(GeneBank登录号为MH708535)，全长共3 859 bp，其中包含完整开放阅读框（ORF）3 003 bp，编码999个氨基酸。生物信息学分析表明，DlAGO10的保守结构域具有AGO的经典结构域PiWi结构，与甜橙和克莱门柚AGO10蛋白同源性较高。qPCR分析结果表明，在龙眼体胚发生过程中，DlAGO10在龙眼非胚性愈伤组织时期和子叶胚时期的表达量较高，在红核子龙眼合子胚S5阶段的相对表达量最高；不同组织部位的表达情况为，DlAGO10在红核子龙眼雌花中表达量最高，雄花次之，其他组织部位表达量均较低。植物激素和非生物胁迫处理下的表达分析表明，一定浓度的2,4-D、KT和水杨酸（SA）均可 导DlAGO10上调表达，而茉莉酸甲酯（MeJA）即可上调也可下调；盐、渗透、干旱和脱落酸（ABA）胁迫均可上调DlAGO10的表达。【结论】DlAGO10可能参与龙眼体胚发生早期和晚期的转录调控过程，且可能参与生长素、细胞 素、SA和ABA的逆境胁迫信号转导途径，调控龙眼多种非生物胁迫应答过程。 　　关键词：　龙眼; 龙眼体胚发生; AGO10（Argonaute 10）; 表达分析;    　　Abstract：　【Objective】Argonaute family proteins are highly conserved basic proteins that widely exist in the biological community and distribute in different individuals. As the core component of RNA-induced silencing complex (RISC), the Argonaute (AGO) family proteins play a crucial role in RNA interference(RNAi). In plants, the combination of AGO protein and small RNA participates in maintaining the stability of the gene, regulating the development of tissue, embryonic development, cell differentiation and responsing to hormones and stress. The objective of the current study is to discover the effection of argonaute gene in the embryogenic callus , different tissues of Honghezi longan and various hormones, abiotic stresses.【Methods】Based on the database of longan transcriptome, the cDNA sequences of argonaute gene were isolated from longan (Honghezi cultivar) embryogenic callus by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and rapid amplification of cDNA end (RACE). Based on the unigene sequence (CL2736.Contig4) of the DlAGO10, two pairs of 5RACE primers (universal primer UPM-Long and DlAGO10- 5RACE1, universal primer UPM