裂殖酵母对于醛固酮缺乏症模型的构建课件.pptVIP

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2020-12-09 发布于天津
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裂殖酵母对于醛固酮缺乏症模型的构建课件.ppt

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裂殖酵母对于醛固酮缺乏症模型的构建研究背景 ? CYP11B1 酶位于腺粒体内膜，催化 11- 去氧皮质醇和 11- 去氧皮质酮（ DOC ）分别转变为皮质醇和皮质酮。 ? CYP11B2 酶催化醛固酮合成，包括两型酶：即皮质酮甲基氧化酶 Ⅰ （ CMOI ）催化皮质酮的 18- 羟化，而 CMO Ⅱ 则催化 18- 羟皮质酮的 18- 氧化，合成醛固酮。 CYP11B2 突变可引起低血钠和高血钾，但不影响 11- 去氧皮质醇的 11β - 羟化作用。 CYP11B2 酶基因与 CYP11B1 串连排列，而且 93% 的氨基酸同源。 ? 醛固酮缺乏症 (aldosterone deficiency) 又称为低醛固酮血症 (hypoaldosteronism) ，是由于醛固酮 (aldosterone ， ALD) 分泌减少或者外周作用缺陷所致的一种内分泌疾病。 CYP11B2 酶的工作机理 CYP11B2 的活性检测 ? 放射性标记的 DOC 的含量的检测（高效液相电泳和放射自显印迹法、免疫检测） ? 本次试验的目的是为了大量表达 CYP11B2 酶，所以使用高效液相电泳来测定材料 —— 裂殖酵母菌株 NCYC2036 ? Kawamoto 的研究中发现了 Leu106Pro, Arg249Ser, 和 Glu258Gly 等位点 ? 本次试验以 Leu106Pro 作为 CYP11B2 的插入位点，得到 pINT5-CYP11B2 表达载体 ? MB164 菌株作为野生型高表达 CYP11B2 酶的菌株起到对照作用方法结果分析试验结果