微生物检验实际操作作业指导书（定稿）.docVIP

微生物检验作业指导书 PAGE PAGE 2 微生物检验作业指导书 目 录 TOC \o 1-3 \h \z \u 一、 菌落总数测定作业指导书 3 （一） 菌落总数测定过程概述 3 （二） 菌落总数测定过程及注意事项 3 1 培养基的制备 3 2 样品的采集、处理和稀释 4 3 倾注平板 5 4 培养 6 5 菌落计数 7 6 菌落总数结果与报告 7 7 检验记录表格样本 8 8 其他注意事项 9 二、 大肠菌群测定作业指导书 9 （一） 大肠菌群测定过程概述 9 （二） 大肠菌群测定过程及注意事项 9 1 培养基的制备 9 2 样品的采集、处理和稀释 10 3 初发酵试验 11 4 复发酵试验 11 5 大肠菌群检验记录表格样本（表3或表4） 11 6 大肠菌群最可能数（MPN）的报告 11 7 大肠菌群测定过程中注意事项 11 三、 微生物检验常见问题答疑 13 四、 食品微生物检验实验室要求 15 （一） 无菌操作要求 15 （二） 无菌室使用要求 15 （三） 消毒灭菌要求 16 （四） 培养基制备要求 17 （五） 样品采集及处理要求 18 （六） 样品检验、记录和报告的要求 18 菌落总数测定作业指导书 菌落总数测定过程概述 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每g（mL）原始样品中所含微生物菌落总数。 菌落总数测定的基本操作包括：培养基的制备→灭菌→样品的稀释→倾注平皿→培养48小时→计数报告。 菌落总数测定过程及注意事项 培养基的制备 培养基的称量及溶解 培养基可以选择成品，也可自行制备。 选择成品：称取平板计数琼脂培养基（杭州天和）23.5g放入1000mL烧杯中，加1000mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌，电炉上煮沸溶解，调节pH7.0±0.2，分装于锥形瓶中。 自行制备培养基：称取胰蛋白胨5.0g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖1.0g，琼脂15.0g，溶解于1000mL蒸馏水中，电炉上煮沸溶解，调节pH7.0±0.2，分装于锥形瓶中。 培养基溶解时的注意事项： 加热溶化过程中，要不断搅拌。 pH值必须按标准要求准确测定。 所用器皿要洁净，勿用铜质和铁质器皿。 分装培养基时，注意不要使培养基在瓶口或管壁上端粘染。 培养基的灭菌 将煮沸的培养基转移至三角瓶中，用硅胶塞或棉塞密封。 将培养基在121℃高压下保持15分钟，完成灭菌后将灭菌锅进行排气，取出培养基置于46℃水浴锅中保温待用。 注意事项： 蒸汽灭菌中，在恒压之前，一定要排尽灭菌锅中的冷空气，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，会大大降低灭菌效果。 在使用高压灭菌锅时，必须将灭菌锅内的冷空气完全赶光，否则压力表所表示的压力是水蒸汽压力和空气压力的总和，不是水蒸汽的实际压力，它所相当的温度与灭菌锅内的温度是不一致的。 培养基的灭菌时间和温度，需按照规定进行，以保证杀菌效果和不损失培养基的必要成份。 培养基的灭菌时间和温度，需按照规定进行，以保证杀菌效果和不损失培养基的必要成份。 样品的采集、处理和稀释 操作方法 以无菌操作取待检样25g（或25mL)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的无菌锥形瓶内，经充分振荡、研磨或均质，制成1：10的均匀稀释液。 用1mL灭菌吸管或移液器吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。 另取1mL灭菌吸管，从1:100稀释液中吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：1000的稀释液。 其它浓度稀释液可按照以上操作方法制备。 注意事项 样品的采集和处理。 如系肉、鱼等固体样品，为保证试样分布均匀，最好剪细于灭菌乳钵内与稀释液研匀，或与稀释液同置于灭菌均质器杯中，以8000-l0000rpm速度搅拌1分钟。 如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。 无菌操作。 操作中必须有“无菌操作”的概念，检验中所用玻璃器皿，如培养皿，吸管、试管等必须是完全灭菌的，并在灭菌前彻底洗涤干净，不得残留有抑菌物质。所用剪刀、镊