甘肃陇南地区华山松溃疡病病原菌的鉴定.pdfVIP

摘要 华山松(Pinus armandiiFranch.)是我国广泛分布与栽植的本土树种。近年来在华 山松主要分布区的甘肃陇南地区发生一种新的溃疡病，枝干被感染后在表皮层产生黑 褐色病斑，病情加重后组织失水，表面凹陷产生纵裂伴有流脂，后期导致植株针叶稀 疏、枯黄，严重时整株枯死。为明确引起华山松溃疡病的发生原因、发生规律以及病 原菌的类型、生物学特性，本研究于2018年-2019年对我国甘肃陇南地区发生的华山 松溃疡病进行了实地调查，结合传统形态学鉴定和分子系统发育学研究技术，鉴定了 来自感病华山松不同分离部位的真菌类型，比较了不同菌株的致病性，并明确了致病 菌的相关生物学特性。主要研究结果如下： （1）甘肃陇南地区华山松溃疡病的病情调查结果显示：该病害在甘肃陇南地区 发生严重，主要为害10～30年长势较弱的华山松，发病林地的病株率为68.83％，平 均病情指数为30.17。据观察该病的症状表现为：侵入初期，降低寄主活力，进而在 表皮层产生圆形、椭圆形的变色病斑，并逐渐向周围扩展，发病后期寄主组织失水， 表面凹陷，伴随病菌子实体的出现。通过解剖病害组织，可发现内皮层和木质部表层 均呈褐色。 （2）从健康和发病的华山松树干分离与纯化，共获得97株菌株。对上述菌株采 用ITS、TEF 及RPB2 等基因进行系统发育学分析，结合形态学特征鉴定为9个种。 其中Neocosmosporasilvicola 为优势菌种，分离频率最高为14.17%。在科的分类水平 上，以丛赤壳科 （Nectriaceae）为优势菌群，占总菌株数量的44.33%。 （3）选择从子实体处、病健交界处、健康处以及病斑处分离获得的8株丛赤壳 科真菌作为接种供试菌株，通过接种离体华山松枝条、活体华山松苗木及新鲜柠檬， 测定不同菌株的致病性。结果显示Neocosmosporasilvicola 的2 株菌株在以上三种试 验中均有致病性，且编号为PCD1的菌株致病性显著较高，其它6株菌株均未表现致 病性。结合系统发育树及培养特性可知，Neocosmosporasilvicola 为华山松溃疡病病 原菌，该菌是中国新记录种。同时，本文也是Neocosmosporasilvicola 引起松科植物 溃疡病的首次报道。 （4）通过测定病原菌菌株PCD1在不同营养条件、温度、光照、pH、氮源与碳 源条件下菌丝的生长速率，结果表明菌株PCD1在PDA 培养基上菌丝生长最快，在 I OA 培养上菌丝生长的最慢；最适温度区间为20℃～30℃，在 10℃低温条件下也能 缓慢生长；黑暗条件下菌丝生长最佳，12h 光照交替光照条件下生长最为缓慢；在 pH4～11之间均能生长，最适pH 为6～9；菌株在以淀粉作为替换碳源的查氏培养基 上菌丝的生长速率最快，因此淀粉是病原菌的最适碳源；以硝酸钠作为替换氮源的查 氏培养基上菌丝的生长速率最快，故硝酸钠为其最适氮源。 关键词：华山松，溃疡病，新赤壳属，病原菌鉴定，生物学特性 II 目录 1 引言1 1.1 华山松的概述1 1.1.1 华山松的分布1 1.1.2 华山松的价值1 1.2 华山松枝干病害的种类1 1.3 松树枝干病害的类型及研究进展2 1.3.1 松树枝干病害的类型2 1.3.2 松树枝干病害的发生规律4 1.3.3 松树枝干病害的综合防治措施5 1.4 丛赤壳科真菌的研究进展7 1.4.1 丛赤壳科真菌概况7 1.4.2 丛赤壳科分类学研究及系统发育概况7 1.4.3 丛赤壳科相关病原真菌8 1.5 本研究的目的及意义8 2 材料与方法9 2.1 华山松溃疡病发病情况调查…………………………………………………………9 2.1.1 调查区概况……………………………………………………………………………..…9 2.1.2 华山松溃疡病病症及危害程度调查………………………………………...……..………..9 2.2 华山松溃疡病标本的采集、分离与鉴