1肺部感染诊断难点：病原学诊断的规范化和新技术.ppt

CAP: 痰液革兰染色作用不清楚 目的 : CAP 病人痰革兰染色检测肺炎链球菌作用 方法 : 检索 Medline 1966 to 1993 英文发表论文 ( 检索词 : sputum,Grams stain,pneumonia) 规则 : 3 名盲法评述者独立判读文献 入选 : 11 篇前瞻性研究和 1 篇回顾性研究共 1322 pt 证据 : 敏感性 15%~100% , 特异性 11%~100%. 多数 研究敏感性 70% 评述 : 70% 系脓性痰 . 缺陷 : 限 Medline 英文文献 ; 样本 数、研究规模、盲法、阳性结果的定义或抗生素 使用对照与试验特征无统计学上的相关性 Reed WW, et al: Sputum Grams stain in community-acquired pneumococcal pneumonia: a meta-analysis. Western Journal of Medicine 1996; 165: 197-204 2020/1/31 Dr.HU Bijie 31 湿片检查 ? 真菌检查：与含有 10% 甘油的 10%KOH 混合于载玻片 上，盖上盖玻片，湿盒中放置 15 ～ 30min ? 有经验的技术员可轻易识别皮炎芽生菌、粗球孢 子菌和新型隐球菌； ? 可检出丝状菌； ? 有动力的病原体，如一种引起二重感染的粪小杆 线虫，可以在湿片中发现。 ? 鞭毛虫（？） 2020/1/31 Dr.HU Bijie 32 2020/1/31 Dr.HU Bijie 33 BAL 离心沉淀物细胞学检查推荐 微生物 涂片数量 染色方法 细菌 军团菌 真菌 分枝杆菌 病毒 1 5 2 3 革兰染色 荧光抗体染色 Gomori 乌洛托品银染色， 湿片检查 抗酸染色 含单克隆抗体染色测 CMV 、 HSV 等 肺孢子菌 2020/1/31 3 Gomori 乌洛托品银染色 Dr.HU Bijie 34 咳痰培养必须用半定量方法 ? 定性鉴定的普通培养方法不易区分感染菌或污染菌； ? 标准定量培养方法繁琐，建议用半定量方法； ? 方法：四区划线接种标本进行培养，每划一区后均需火烧 接种环，使细菌在平板上生长数逐级下降； ? 报告：优势菌生长菌落为 3+ 或 3+ 以上。也可分大量 heavy 、中等量 moderate 和少量 scattering 生长三种； ? 可以只鉴定和报告优势生长的需氧菌和兼性厌氧菌。只在 原始区生长的少数菌不必作常规鉴定，除非临床或直接革 兰染色提示可能为感染的病原菌。 2020/1/31 Dr.HU Bijie 35 划线接种平板半定量判断标准 分级 1 ＋ 2 ＋ 3 ＋ 4 ＋ 2020/1/31 划线区域菌落数 原始区 ＜ 10 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 Dr.HU Bijie 第二区 第三区 ＜ 5 ＞ 5 ＞ 5 ＜ 5 ＞ 5 36 痰标本的培养基选择 ? 培养基包括分离和鉴别革兰阳性菌的血平板、 革 兰阴性菌鉴别的平板如麦康凯平板 ； ? 涂片显示嗜血杆菌样或奈瑟菌样的优势菌（每油 镜视野≥ 10 个细菌）时，应增加接种富含营养的 巧克力平板，分离流杆、脑膜炎、卡他； ? 痰涂片发现较多 GNB 或系医院内肺炎的痰标本，应 加麦康凯平板； ? 应少用培养平板进行细菌分离，要熟悉细菌在培 养基上的生长模式，而不是靠选择培养基。 2020/1/31 Dr.HU Bijie 37 培养环境： CO2 ? 平板置于 3 ％～ 10 ％ CO2 中 35- 37℃孵育。 ? 烛缸可基本达到这一要求，但近年来的研究显示 用 CO2 培养箱分离肺炎链球菌和流感嗜血杆菌要明 显优于烛缸。 ? 为提高细菌培养和分离质量，细菌室应常规配备 CO2 培养箱，呼吸道标本在初代培养时尤为重要。 2020/1/31 Dr.HU Bijie 38 菌落观察与鉴定 ? 平板孵育过夜（ 18-24h ），观察并记录有几种不 同的菌落类型。 ? 咳痰标本：优势菌几种菌落应分离鉴定。 ? 直接采集的下呼吸道标本如 PSB 、 BAL 、 TNA 、胸腔 穿刺液中生长的所有菌落类型均应鉴定。 ? 如果病人已接受抗生素治疗或革兰染色所见细菌 未分离到， 48h 后应重新观察平板。 ? 某一菌落是否需要鉴定，应根据其引起下呼吸