原核生物基因表达调控概述和应用.pptVIP

原核生物基因表达调控概述以及应用 研究发现，当mRNA合成起始以后，如果培养基中有色氨酸，转录总是在前导区终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子，终止trp基因转录。 2）mRNA前导区序列分析 trp前导区的碱基序列已经全部测定，其中4个分别以1、2、3和4表示的片段能以两种不同的方式进行碱基配对，有时以1-2和3-4配对，有时只以2-3方式互补配对。 4 1 2 3 Terminator haripin 4 1 2 3 3）转录的弱化效应 （1）当培养基中色氨酸的浓度很低时，负载有色氨酸的tRNA也就少，这样翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会很慢，当4区被转录完成时，核糖体才进行到1区，这时的前导区结构是2-3配对，所以转录可继续进行。 ? 3’ 5’ 5’ 3’ 4 1 2 3 RNA Pol. Ribosome Help, I need Tryptophan （2）当培养基中色氨酸浓度较高时，核糖体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在4区被转录之前就到达2区，使2-3区不能配对，3-4区自由配对形成发夹终止子结构，转录被终止，trp操纵子被关闭。 3’ 5’ 5’ 3’ 4 1 2 3 Ribosome RNA Pol. 4）弱化子的作用机制 弱化子对基因活性的影响是通过影响前导序列mRNA的结构而起作用的。 起调节作用的是某种氨基酰-tRNA的浓度。 属于这种调节方式的有大肠杆菌中的色氨酸操纵子、苯丙氨酸操纵子、苏氨酸操纵子、异亮氨酸操纵子等等。 4）乳糖操纵子的正调控 当大肠杆菌以乳糖为唯一碳原时，lac操纵子可被乳糖诱导而表达，可是在培养基中同时加入葡萄糖时，细菌优先利用葡萄糖，只有葡萄糖耗尽时，乳糖才能诱导基因的表达，这种现象称为分解物阻遏/代谢物阻遏（catabolite repression); 葡萄糖效应：是指当葡萄糖和其它糖类一起作为细菌的碳源时葡萄糖总是优先被利用，葡萄糖的存在阻止了其它糖类的利用的现象。 　　　 细菌在富含葡萄糖的培养基上生长的时，葡萄糖可降低细菌体内cAMP的水平。 在细菌中，cAMP与CAP（catabolite activator protein）结合形成二元复合物共同发挥作用。只有cAMP存在时，CAP才有活性。 CAP是cAMP受体蛋白（ cAMP receptor protein, CRP),其分子内有DNA结合区及cAMP结合位点，是一个正调控因子，生化和遗传学实验证明，CAP可以结合到启动子的某个部位而激活操纵子的转录。 在依赖CAP的启动子上起始转录必须有CAP参与。cAMP下降，CAP无活性不能与控制区结合，RNA聚合酶就不能启动转录。 原因： 在lac操纵元的启动子Plac上游端有一段序列与Plac部分重叠的序列，能与CAP特异结合，称为CAP结合位点（CAP binding site）。CAP与这段序列结合时，可增强RNA聚合酶的转录活性，使转录提高50倍。相反，当有葡萄糖可供分解利用时，cAMP浓度降低，CRP不能被活化，lac操纵元的结构基因表达下降。 　The Lac Operon:I. 葡萄糖存在，乳糖不存在 Repressor Promoter LacY LacA LacZ Operator CAP Binding RNA Pol. Repressor Repressor Repressor mRNA CAP 葡萄糖存在，乳糖不存在，阻遏蛋白与操纵基因结合，基因不转录 X The Lac Operon:II. 乳糖存在，葡萄糖不存在 Repressor Promoter LacY LacA LacZ Operator CAP Binding Repressor Repressor mRNA CAP cAMP Lac Repressor Repressor X CAP cAMP CAP cAMP RNA Pol. RNA Pol. 葡萄糖不存在，乳糖存在，阻遏蛋白失活，cAMP+CAP与CAP位点结合结合，促进基因转录 The Lac Operon:III. 葡萄糖和乳糖都存在 Repressor Promoter LacY LacA LacZ Operator CAP Binding Repressor Repressor mRNA CAP Lac Repressor Repressor X RNA Pol. X 葡萄糖存在，乳糖存在，阻遏蛋白失活， cAMP缺乏，不与CAP结合，基因不转录 The Lac Operon:IV. 乳糖不存在，葡萄糖也不存在 Repressor Promoter LacY LacA LacZ Operat