薄壳山核桃ISSR遗传多样性分析及两种病原菌鉴定.pdfVIP

摘 要 本文对33 份薄壳山核桃种质资源进行ISSR-PCR 分子标记，建立不同品种之间 的亲缘关系树状图，并对薄壳山核桃干腐病和叶斑病进行研究，明确其致病菌，为 薄壳山核桃种质资源遗传多样性分析以及病害防治提供理论依据。试验结果如下： 1、分别建立了薄壳山核桃分子标记的最佳PCR 反应体系：94℃预变性4 min ， 94℃变性 30 秒；退火温度50℃-53℃之间 45 秒；72℃延伸 35 秒，循环35 次, 72℃ 再次修复延伸10 min,扩增结束后4 ℃冰箱保存。 2 、PCR 反应产物经电泳检测，共得到清晰扩增位点58 个，其中多态性位点45 个，多态性位点百分率（PPB ）为77.59%，Nei’s 基因多样性（H ）为0.3010，Shannon 信息指数(I)为0.4182，说明薄壳山核桃具有丰富的遗传多样性。根据NTSYS 软件计 算33 份薄壳山核桃各品种间UPGMA 遗传距离在0.67-0.84 之间，并绘制聚类分析 树状图，在遗传相似系数0.68 处划分A 、B 、C、D 、E 五个类群，在这5 个类群中， D 类包含品种最多有14 种，E 类最少只包含海核桃一个品种，说明海核桃与其他品 种遗传距离最远。 3、分离纯化薄壳山核桃病变的枝条和病叶，得到两种菌株，采用柯赫氏法则测 定这两种病原菌均为致病菌株。结合形态学与rDNA-ITS 分子生物学分析确定薄壳山 核桃干腐病病原菌为葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea ，叶斑病病原菌为链格孢菌。 关键词：薄壳山核桃；ISSR ；聚类分析；干腐病；叶斑病；生物学特性 I 目 录 摘 要I ABSTRACT II 目 录V 第一章 引 言 1 1.1 薄壳山核桃生物学特征 1 1.1.1 薄壳山核桃形态学特征 1 1.1.2 薄壳山核桃枝、芽生长特性2 1.1.3 薄壳山核桃根系生长特性2 1.1.4 薄壳山核桃的花芽分化2 1.1.5 薄壳山核桃雌花、雄花开花特征3 1.2 薄壳山核桃在我国的引种发展3 1.3 薄壳山核桃分子标记研究进展4 1.3.1 ISSR 分子标记技术4 1.3.2 研究进展5 1.4 薄壳山核桃病害研究现状及防治措施5 1.4.1 薄壳山核桃病害研究现状5 1.4.2 薄壳山核桃病害防治措施7 作好病害监测工作7 选种抗病品种7 加强种植管理7 1.5 本研究的主要内容和意义9 第二章 薄壳山核桃ISSR 分析研究 10 2.1 试验材料与方法 10 V 2.1.1 供试材料 10 2.1.2 实验仪器与试剂 11 2.1.3 DNA 的提取 11 材料预处理及DNA 提取试剂盒 11 提取过程 11 2.1.4 DNA 浓度测定及稀释 12 琼脂糖凝胶电泳检测 12 蛋白核酸测定仪定量 13 2.1.5 ISSR-PCR 扩增体系的建立与优化 13 2.1.6 ISSR-PCR 引物的筛选 13 2.1.7 数据统计与软件分析 14 2.2 结果与分析 14 2.2.1 ISSR-PCR 扩增结果 14 2.2.2 薄壳山核桃品种遗传多样性水平分析 15