原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
原代细胞培养操作
取材：
1． 用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。
2． 把整个孕鼠浸入盛有 75％乙醇的烧杯中数秒钟消毒， 取出
后放在大平皿中携入超净台。
3． 用无菌的镊子和剪子在前腿下作一 腹部水平切口，用无菌
镊子将皮肤扯向后腿。
4． 用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，
置于无菌的培养皿上。
5． 剔除胚胎周围的包膜（若胚胎较大，应剪去头、爪） ，将
胚胎放于无菌的含有平衡盐溶液的培养皿中。用平衡盐溶
液漂洗胚胎至清洗液清亮。
切割（2 人一组）：
6． 将部分胚胎转移至一个无菌小瓶中，用平衡盐溶液漂洗。
7． 然后用眼科手术剪刀小心地反复剪切胚胎，直到成 1mm3
左右的小块，再用平衡盐溶液清洗组织块至清洗液清亮。
8． 静置数分钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。
消化、接种培养（ 2 人一组）：
9． 视组织块量加入 5—6 倍的 0.25% 胰酶液（约 3ml），37℃
中消化 20—40 分钟，每隔 5 分钟振荡一次。
10． 静置，吸去上清，加 2ml 细胞生长液，用吸管反复吹打组
织块，使细胞分离，静置，使未分散的组织块下沉。
11． 取部分细胞悬液接种至加了细胞生长液（约 3ml）的培养
瓶中（若计数，按每细胞瓶 1x 106 细胞的数量接种），置
于 37℃，二氧化碳培养箱中培养。 培养 3～5 天观察结果。
文档评论（0）