凝血酶回应性改性材料表层镀层的配制及性能科学研究.docVIP

凝血酶回应性改性材料表层镀层的配制及性能科学研究 摘要 血液接触材料，在临床医学和生物技术领域已经得到了广泛的应用，如冠状动脉支架，心脏瓣膜，血液透析器，心肺旁路系统等。 异体材料的植入会不可避免地导致血栓的形成，这是血液接触装置植入失败的主要原因，因此提高生物材料的血液相容性显得极其重要。 目前已经开发了一系列用于提高血液相容性的生物材料改性表面技术，包括生物惰性表面、生物活性表面和促内皮化表面。 在材料表面引入具有抗凝/抗血栓活性物质是最常用的抗血栓改性策略，然而，在复杂的血液环l 为了在材料表面实现上述理想的抗血栓过程，本论文的研究内容主要是将具有血栓应激性纤溶功能的t-PA纳米胶囊和与具备抗凝血与促内皮化性质的肝素-聚赖氨酸纳米胶囊相结合，共同接枝到被多巴胺包被的材料表面上，制备基于凝血酶响应性的多功能改性表面涂层。 如此修饰的表面除了具备上述凝血酶响应性纤溶活性以外，在肝素组分的作用下，还能够有效延长血栓形成时间，并促进内皮细胞的粘附与生长。该涂层有望在实际应用中满足材料与血液接触不同阶段的不同抗血栓需求。 关键词：抗血栓，纤溶，促内皮化，t-PA，肝素 第一章 前言 1.1 生物材料表面诱导的血栓形成 1.1.1材料表面诱发血栓 与血液直接接触的合成材料表面的凝血和血栓的形成引起了一系列严重的问题，包括人造器官、心血管系统植入体和体外血液接触医疗器械的失败[1]。例如，血栓问题往往会导致直径小于6毫米血管接枝的堵塞[2]、静脉导管的封闭[3]以及心脏辅助器件功能的丧失[4]等。而且，大量实验已经证明，异体植入材料表面引发的血栓是无法完全避免的，所以，材料抗血栓改性表面一直是血液接触材料领域备受关注的课题。 了解血栓，首先要了解凝血过程。即血液凝固，是流动状血液变为凝胶状血液的过程，它是止血过程中的重要部分。凝血过程指的是一系列凝血因子经过阶梯性酶促反应，生成凝血酶，最终形成纤维蛋白凝块的过程。此过程通常包括两种凝血途径：一种为内源性凝血途径，主要由接触相凝血因子XII在材料表面的吸附及激活引发;另一种为外源性凝血途径，主要由受损组织释放的因子诱发。两者的主要区别在于启动方式和参与的凝血因子的不同。但这两种方式并不对立，而是相互联系的。这两种途径在凝血因子X激活后，会进入共同的凝血途径，最终导致凝血酶的生成以及纤维蛋白的形成[5]。 凝血和抗凝是机体凝血系统的两个方面，两者保持动态平衡，使得机体的血流系统得以正常运作。抗凝系统的主要方式是体液抗凝和细胞抗凝，其中，体液抗凝是指体液中的抗凝因子对凝血因子活性的调控和抑制，包含抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)[6]、蛋白C系统[7]、肝素等。 1.1.2纤溶过程 此外，与凝血过程一样，纤溶也是机体的一种重要的保护性生理反应。正常的纤溶过程中涉及到纤维蛋白形成(凝血)和降解(纤溶)，凝血过程是血液系统对血管损伤的生理响应，纤溶过程则是以降解蛋白的方式来移除纤维蛋白，保证血管的通畅。其中，降解过程涉及到一系列蛋白质，主要包括血纤维蛋白溶酶原(Plg)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、血纤维蛋白溶酶(plasmin，pl)等。纤溶过程中的核心蛋白质是Plg，五个名为kringle的线圈形三级结构包含在它的结构中。其中K1和K4的内环中都存在一个赖氨酸结合位点(LBS)，对于羧基端赖氨酸具有特异性亲和力[8]。而研究发现，在t-PA的分子结构中也具有两个kringle片段，其K2也包含LBS，同样可以和暴露在降解的纤维蛋白表面的赖氨酸残基相结合。 纤溶过程的降解机理是：Plg通过与纤维蛋白的赖氨酸残基作用，与同样与纤维蛋白赖氨酸残基结合的t-PA形成三元复合物。在t-PA激活剂的作用下，Plg位于Arg561-Val562处的肽键会断裂，进而转变为pl。pl裂解纤维蛋白凝块，使其暴露出更多的赖氨酸残基，进而聚集更多纤维蛋白溶酶原(Plg)，加速纤溶过程[9]。 生物血液接触材料植入机体体内时，最先引发的反应是血浆蛋白质在其表面的快速吸附[10]，随后所形成的蛋白质吸附层进一步诱导血小板的粘附和激活、补体激活和白细胞的反应等，最终导致血栓的形成。 1.2 表面改性策略 1.2.1 生物惰性表面 血浆蛋白质在材料表面的吸附是血栓形成过程的最初反应。因此，可以通过在材料表面修饰生物惰性聚合物来提高材料的血液相容性。当前常用的生物惰性材料大致包含两类：亲水性聚合物与两性离子聚合物。 接枝亲水性聚合物的方法，相对来说比较灵活、易于调控而且不会损伤本体的机械性能，故而应用广泛。其中，最常用的亲水性聚合物是聚乙二醇(PEG)[11]