法氏囊活性肽BPP--(Ⅲ--Ⅴ)和BP--(Ⅰ--Ⅳ)的免疫佐剂特性研究.pdfVIP

摘要 摘 要 接种疫苗是预防和控制传染病的重要途径，而佐剂在疫苗研制中起着不可或 缺的作用。法氏囊活性肽是从法氏囊中提取出来的生物活性物质，大多数具有免 疫佐剂功能，近年来，随着质谱技术在蛋白质分离鉴定方面的广泛应用，法氏囊 活性肽BPP 家族中的BPP-III ，BPP-IV ，BPP-V 和 BP 家族中的BP-I ，BP-II ，BP-III 和BP-IV 被分离出来，但是它们的生物学活性不清楚。本研究通过免疫攻毒实验 对BPP-(III-V)和BP-(I-IV)在H9N2 型禽流感病毒（AIV ）灭活疫苗上的佐剂特性 进行评价，筛选出具有优良佐剂潜能的活性肽，然后将筛选出来的活性肽偶联到 AIV 表位肽序列上，制备表位肽疫苗，进而通过动物实验评价这些法氏囊活性肽 的分子佐剂潜能；最后利用聚多巴胺（PDA ）材料制备含有筛选肽的表位肽纳米 疫苗，并对纳米疫苗的免疫效果进行评价。本研究旨在为新型法氏囊活性肽疫苗 佐剂的开发和新型纳米疫苗的研发提供参考依据。本研究主要包括以下四个方面 的内容： 1、BPP 家族活性肽BPP-(III-V)对H9N2 型AIV 疫苗的免疫佐剂效应 为了探究 BPP-(III-V) 的免疫佐剂特性，本研究将BPP-(III-V)分别作为佐剂， 联合H9N2 型AIV 灭活疫苗对小鼠进行免疫，检测小鼠的体液免疫和细胞免疫指 标。结果显示，BPP-IV 不能增强机体的体液或细胞免疫应答；BPP-III 虽然对抗 + + 体产生没有影响，但是促进了CD3 和CD8 T 细胞的产生，同时增强了CTL 应答 水平和脾脏T 淋巴细胞的增殖活性；然而BPP-V 不仅促进了抗体（HI ，IgG 及其 + + + 亚型IgG1 ）和细胞因子IL-4 的产生，而且增强了CD3 、CD4 和CD8 T 细胞的 数量，也提高了CTL 水平，并促进了脾脏淋巴细胞的增殖活性。此外，在动物攻 毒实验中，BPP-III 或BPP-V 联合H9N2 型AIV 疫苗能够减少免疫小鼠肺脏病毒 RNA 拷贝数和病毒滴度，并减少炎症细胞浸润。这些结果表明BPP-III 通过增强 细胞介导的免疫反应来抵抗病原；BPP-V 在体液免疫和细胞免疫水平均诱导了强 烈的免疫反应，提供了机体针对H9N2 型AIV 攻击的保护。因此BPP-V 具有良 好免疫佐剂潜能。本研究为BPP-V 作为新型免疫佐剂的进一步研发提供了理论基 础。 2 、BP 家族活性肽BP-(I-IV)对H9N2 型AIV 疫苗的免疫佐剂效应 为了探究BP-(I-IV) 的免疫佐剂特性，本研究将BP-(I-IV)分别作为佐剂，联合 H9N2 型AIV 灭活疫苗对小鼠进行免疫，检测小鼠的体液免疫和细胞免疫指标变 化。结果表明，BP-I 有效增强了细胞介导的免疫反应，增加了 Th1 （IFN-γ ）和 Th2 （IL-4 ）型细胞因子的分泌，并诱导了细胞毒性T 淋巴细胞反应；BP-II 主要 I 摘要 提高特异性抗体的产生，特别是中和抗体的产生，并增加Th1 和Th2 型细胞因子 的分泌；BP-III 对抗体产生或细胞介导的免疫反应没有显著影响；而BP-IV 在体 液和细胞水平均诱导了强烈的免疫反应。此外，在进行病毒攻击后，BP-I 和BP-II 促进了肺脏病毒的清除并提供了对小鼠肺脏的保护，BP-IV 可显著降低病毒滴度 和组织病理学损伤。因此BP-IV 具有良好免疫佐剂潜能。本研究为BP-IV 作为新 型法氏囊活性肽免疫佐剂的进一步研发提供理论依据。 3、偶联BPP-V/BP-IV 的H9N2 型AIV 表位肽疫苗的制备及免疫效果评价 为了探讨BPP-V/BP-IV 的分子佐剂潜能，本研究对H9N2 型AIV 的HA 蛋白 的T 、B 细胞表位进行