转录调控2021年整理.pdfVIP

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
分子机制研究套路(五) 转录调控 课题:转录因子 A对 B基因的转录调控 1.概念介绍: 转录水平的调控是真核生物基因表达调控中重要环节。真核细胞 RNA 聚合酶自身对启动 子并无特殊亲和力,单独不能进行转录,也就是说基因是无活性的。因此,转录需要众多的 转录因子和辅助转录因子形成复杂的转录装置。在基因转录起始阶段,通用转录因子协助 RNA 聚合酶与启动子结合,但其作用很弱,不能高效率地启动转录。只有在反式作用因子 (基因特异性转录因子)的协助下,RNA 聚合酶Ⅱ和 TF Ⅱ才能有效地形成转录起始复合物。 反式作用因子(trans acting factor)在转录调节中具有特殊的重要性。它是能直接或间接地 识别或结合在顺式作用元件 8 ~12bp 核心序列上,参与调控靶基因转录效率的一组蛋白质。 这类 DNA 结合蛋白有多种,能特异性识别这类蛋白的序列也有多种,正是不同的 DNA 结 合蛋白与不同的识别序列之间的空间结构上的相互作用,以及蛋白质与蛋白质之间的相互作 用构成了复杂的基因转录调控机制的基础。 在真核生物中转录因子的调控是最重要,也是研究得最多的。蛋白质相互作用在转录因子活 性的调控方面具有重要的意义。细胞内的反式作用因子都是处于有活性和无活性两种状态, 这两种状态是可以转换的。反式作用因子处于无活性状态时,与之相应的基因就不能表达; 反式作用因子处于有活性状态、并与相应的顺式作用元件结合时,就可以促进 RNA 聚合 酶和通用转录因子与相应的启动子结合,形成转录起始复合物。所以,真核基因的表达调控 主要是调节反式作用因子的活性,随后反式作用因子调控基因的转录起始。 转录因子被激活后,即可识别并结合上游启动子元件和增强子,对基因转录发挥调控作用。 大部分转录因子在激活以后与顺式作用元件结合,但也可能有一些转录因子是先结合 DNA , 1 被激活后才发挥调节功能。增强子和上游启动子元件可以结合一些相同的蛋白质,在不同的 基因中,存在着同样的顺式作用元件,这表明一些数量有限的基因调控蛋白控制着真核细胞 的基因表达。 每一种转录因子结合顺式作用元件后虽然可以发挥促进或抑制作用,但是转录因子对基因表 达的调控不是由单一的因子完成的,而是几种因子组合,发挥特定的作用。通常是几种不同 的转录因子控制一个基因的表达,一种转录因子也可以参与调控不同的基因表达调控。转录 因子的数量是有限的,转录因子的组合作用方式使有限的转录因子可以调控不同的基因表达。 2.研究思路: 2.1 确定基因 B 启动子转录核心区域3 2.1.1 扩增基因 B 上游启动子区3 2.1.2 酶切 PCR 产物和 pGL3-Basic 质粒3 2.1.3 构建 pGL3-Basic-基因 BP(-1761/+37)质粒 P (promoter)3 2.1.4 不同长度的基因 B 启动子区的荧光素酶报告基因质粒的构建3 2.1.5 双荧光素酶报告系统确定基因 B 启动子区核心区域3 2.2 转录因子A 对基因 B 的转录调控作用5 2.2.1 构建转录因子 A 真核表达载体5 2.2.2 转录因子 A 上调基因 B 的转录表达5 2.2.2.1 体外证实转录因子 A 结合基因 B 启动子 5 2.2.2.2 体内证实转录因子 A 结合基因 B 启动子 5 2.2.2.3 突变转录因子A 结合位点显著下调基因 B 转录活性 6 2.3 转录因子A 对基因 B 转录激活作用6 2.4 转录因子A 参与基因 B 转录调控6 2 2.1 确定基因 B 启动子转录核心区域 2.1.1 扩增基因 B 上游启动子区 以基因 B 的转录起始位点为+1 ,扩增基因 B 启动子区(- 1796bp 到+37bp),电泳结果显示 条带特异,大小符合预期设计。接着用 DNA 回收试剂盒回收 PCR 所得扩增片段,用内部 短引物鉴定 PCR 结果,电泳图显示这两对引物均扩增出位置正确的条带,_bp 和_bp ,提 示扩增的 1.8kbp 的片段确实为基因 B 启动子。用 DNA 回收试剂盒回收PCR 产物得基因 B 启动子(- 1796bp 到+37bp)扩增片段。 2.1.2 酶切 PCR

文档评论(0)

number02 + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档