生物科技行业污水微生物指标检查法.pdfVIP

生物科技行业污水微生物指标检 查法 污水总大肠菌群的检验方法 壹、采样方法 用采水器或其他灭菌容器采取污水样 1000 毫升，放入灭菌瓶内，如果是经加氯处理的污水， 需加 1.5%硫代硫酸钠 5 毫升中和余氯。 二、检验方法 总大肠菌群系指壹群需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌在 37℃恒温箱内，培养 24 小时，能使乳糖发酵产酸产气。总大肠菌群数系指每升污水中，所含的总大肠菌群的数目。 （壹）初发酵试验：以无菌操作将各盛有3 倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 5 毫升的 5 支发酵 管内，各接种污水样 10 毫升，将各盛有单料乳糖蛋白胨培养液约 10 毫升 5 支的发酵管内， 各接种污水样 1 毫升，再将各盛有单料乳糖蛋白脏培养液约 10 毫升的 5 支发酵管内，各接 种 1 ∶10 稀释的污水样 1 毫升（相当于原污水样 0.1 毫升）。将此 15 支管已接种的发酵管置 于 37℃恒温箱内，培养 24 小时。 （二）平板分离：经培养24 小时后，将产酸产气及只产酸不产气的发酵管，分别接种 于伊红美兰培养基或品红亚硫酸钠培养基上，置 37℃恒温箱培养 18～24 小时，挑选符合下 列特征的菌落，取菌落的壹小部分，进行涂片、革兰氏染色、镜检。 1 伊红美兰培养基上的菌落色泽： （1）深紫黑色，具有金属光泽的菌落； （2）紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落； （3）淡紫红色、中心色较深的菌落。 2 品红亚硫酸钠培养基上的菌落色泽： （1）紫红色，具有金属光泽的菌落； （2）深红色，不带或略带金属光泽的菌落； （3）淡红色，中心色较深的菌落。 （三）复发酵试验：涂片、镜检的菌落，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取上述典型 菌落 1～3 个接种于壹支单料乳糖发酵管内，然后置于 37℃恒温箱内，培养 24 小时，产酸产 气者（包括小量产气）即证实有大肠菌群存在。 根据证实有大肠菌群存在的阳性管数，查对总大肠菌群近似数（MpN ）检索表（附表 1.1）即是每升污水中的大肠菌群数。此MPN 表中所列数值系指 100 毫升水样中的细菌数， 因此需将表中的数值再乘 10 、为每1000 毫升水中的细菌数。举例：某壹污水样接种 10 毫升 的 5 支管中有5 管为阳性；接种 1 毫升的 5 支管中有2 管为阳性；接种 1 ∶10 稀释水样 1 毫 升（即原污水样 0.1 毫升）的 5 支管皆为阴性，即结果为5 、2 、0 ，查附表1.1 得知 100 毫 升污水中总大肠菌群数为 49 个，即 1000 毫升污水中总大肠菌群数为49×10＝490 个。 总大肠菌群近似数（MPN ）检索表附表 接种量(毫升) 每 100 毫 接种量(毫升) 每 100 毫 升水 升水 样中总大 样中总大 10 1 0.1 10 1 0.1 肠菌 肠 群近似数 菌群近似 数 0 0 0 0 0 4 0 8 0 0 1 2 0 4 1 9 0 0 2 4 0 4 2 11 0 0 3 5