微生物工程实验报告（精选）.docxVIP

PAGE PAGE 10 中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告 实验一 培养基的配制和灭菌 一、目的要求 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。 每 2 人一组，每人一份实验报告。 二、实验材料 1、药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、 KNO、3 ?7H2O、1N HCl、1N NaOH。 2、设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、 75%酒精棉。 MgSO?47H2O、FeSO4 3、材料：天平、药匙、电炉、 pH试纸、烧杯、量筒、 5mL、10mL注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、牛皮纸、线绳、标签等。 移液器（ 1mL 0.2mL ）。 三、实验内容 ( 一) 培养基的配制 1、培养基的配制方法和步骤 称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。 溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 调 pH值：用 1N NaOH或 1N HCl 调 pH，用 pH 试纸对照。 加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。 分装：注意不要污染试管塞或纱布。 包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。 灭菌：在高压锅中， 115 C高温灭菌 30min。2、培养基的配制 富集培养基（液体）： 海水 2216E液体培养基（ g/L ）：蛋白胨 5.0 ，酵母粉 1.0 ，海水 1L，pH 8.0 。 取 50mL分装 250mL三角瓶后， 8 层纱布封口，外包 1 层牛皮纸， 121 C高温灭菌 20min 。 2216E 斜面（固体）： 海水 2216E液体培养基中加入 2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内加入3mL，121 C高温灭菌 20min，灭菌后摆斜面。 2 支/ 小组，共 65 组， 130 支。（15 × 150 规格，带试管帽） 300 mL。 无菌生理盐水和保种液： 生理盐水： NaCl 0.85% 蒸馏水配制。每支试管加入 5mL，盖上试管帽、包扎、121 C高温灭菌 20min。 保种液：生理盐水，加 25%甘油。 碳源优化培养基： 以海水 2216E 液体培养基（蛋白胨 0.5% ，酵母粉 0.1% ，磷酸铁 0.01%，人工海水， pH7.6）为基础，碳源分别是：葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖， 每种碳源的添加量为 1%。 优化实验中每小组做 1 种碳源，即 5 个小组完成一个碳源优化实验。 每种碳源配 12 瓶（50mL/个三角瓶，共 600mL。8 层纱布封口，外包 1 层牛皮纸，灭菌。） ( 二) 分离培养微生物常用器皿的准备 1、清洗一些玻璃仪仪器：如三角烧瓶、试管、培养皿等。 2、制作 8 层纱布（ 108 个），酒精棉（ 2 瓶）。 3、Tip 头（ 0.2 ，1ml，分装枪头盒，牛皮纸包好，灭菌） ； 保种管（ 6 支/ 包，共 12 包） 药勺（ 1 把/ 包，共 12 包，包好，灭菌） 长竹签（ 6 支/ 包，共 12 包，包好，灭菌） 4、卫生 （308 实验室 超净台，实验台面） ( 三) 培养基和玻璃器皿的灭菌方法 1、加压蒸汽灭菌法。其步骤如下： 灭菌锅内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。 接通电源，进行加热。 排除高压锅内的冷空气， 可将排气阀打开，待排出冷空气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到 0.5kg/cm2 时再打开排气阀， 待压力回复到将近零时， 再关闭排气阀。 当压力达 15bl/in2 （即 1.05kg/cm2 ）时, 此时灭菌锅内的温度为 121℃ , 维持 30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、 氨基酸等物时， 应适当降低压力， 延长时间。 灭菌时间一到，切断电源。待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭 菌锅盖，取出物品。 2、紫外线灭菌 一般使用 30W灯管， 9m3空间，距地面 2m，打开紫外灯照射 0.5h ，可使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。 紫外线虽有较强的杀菌力， 但穿透力弱， 即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此上适用于空气表面杀菌。 3、化学药剂消毒灭菌 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有酒精、甲醛、高锰酸钾、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、来苏尔、过氧乙酸等，它们有的是杀菌剂，有的是抑制剂。 四、思考题 1、固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题？ 答：固体培养基加琼脂后加热溶化时应该注意一下问题： 在加热融化时要注意温度。因为琼脂是由从石花菜中提取的胶体多糖制成， 它在 98℃水中能溶解，温度降至 45℃时就凝成固体。所以温度太低时会使琼脂凝成固体，太高又会使其糊化； 受热要均匀，可以垫上石棉网， 在加热过程中， 要用玻璃棒不停缓慢