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液相色谱峰拖尾分析 从色谱柱分离机理角度 造成拖尾的原因多数是因为要分离的化合物是碱性的。 硅胶表面的硅羟基 pKa 值是 2-3 ， 也就是当流动相的 pH 值大于这个值，硅羟基就会解离，这时这个氧带的外层电子对碱的吸 附是特别强的， 很多人知道硅羟基对碱性物质吸附，解决办法：应选择封尾的柱子，但是即 使封尾，不管工艺怎么好，都不会是 100% 能封住。那么就争取从 pH 值角度考虑，减小流 动相 pH ，或者说加三乙胺，三乙胺容易被这个解离的硅羟基吸附，其实作用相当于对色谱 柱封尾。 从流动相的角度 用甲醇做碱性物质要相对比乙腈好，因为甲醇含有 -OH ，多少能抑制硅羟基解离，加缓冲盐 的目的也是抑制硅羟基解离。 所以说种种方法都是抑制硅羟基解离或竞争吸附， 尽量减少解 离的硅羟基对碱性物质的吸附。 前沿峰图 非常有可能是色谱柱的硅胶溶解造成的。 前沿峰还有可能是由溶解性效应引起， 就是溶解样 品的溶液对样品的溶解性远大于流动相。 现在市场上有种色谱柱经过表面处理之后残留的硅 羟基 pKa 值能达到 5.5-6 我不说哪家生产的，用这种柱子做你的流动相 pH 控制在 5.5 以下拖 尾的效果非常好， 另外建议做碱性化合物时选择色谱柱尽量选择比表面积小， 含碳量低些的 色谱柱，效果会好。 A、 峰拖尾 1、筛板阻塞 (a 、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱 ) 2、色谱柱塌陷 (填充色谱柱 ) 3、干扰峰 (a 、使用更长的色谱柱 b 、改变流动相或更换色谱柱 ) 4、流动相 PH 选择错误 (调整 PH 值。对于碱性化合物，低 PH 值更有利于得到对称峰 ) 5、样品与填料表面的溶化点发生反应 (a 、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、换柱子 ) B、 峰前延 1、柱温低 ( 升高柱温 ) 2 、样品溶剂选择不恰当 (使用流动相作为样品溶剂 ) 3、样品过载 ( 降低样品含量 ) 4 、色谱柱损坏 (见 A1、A2) C、 峰分叉 1、保护柱或分析柱污染图 ( 取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻 塞，拆下来清洗。 如果问题仍然存在， 可能是柱子被强保留物质污染， 运用适当的再生措施。 如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。 ) 2、样品溶剂不溶于流动相 ( 改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。 ) D、 峰变形 1、样品过载 ( 减少样品载量 ) E、 早出的峰变形 1、样品溶剂选择不恰当 (a 、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂 ) F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 1、柱外效应 (a 、调整系统连接 (使用更短、内径更小的管路 ) b 、使用小体积的流通池 ) G、 K ’增加时，脱尾更严重 1、二级保留效应，反相模式 (a 、加入三乙胺 ( 或碱性样品 )b 、加入乙酸 ( 或酸性样品 )c、加入 盐或缓冲剂 (或离子化样品 )d 、更换一支柱子 ) 2 、二级保留效应，正相模式 (a 、加入三乙胺 ( 或碱性样品 )b 、加入乙酸 ( 或酸性样品 )c、加入 水( 或多官能团化合物 )d 、试用另一种方法 ) 3 、二级保留效应，离子对 ( 加入三乙胺 ( 或碱性样品 )) H 、 酸性或碱性化合物的峰拖尾 1、缓冲不合适 (a 、使用浓度 50-100mM 的缓冲液 b、使用 Pka 等于流动相 PH 值的缓冲液 ) I 、 额外的峰 1 、样品中有其他组份 (正常 ) 2、前一次进样的洗脱峰 (a 、增加运行时间或梯度斜率 b 、提高流速 ) 3、空位或鬼峰 (a 、检查流动相是否纯净 b 、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积 ) J、 保留时间波动 1 、温控不当 ( 调好柱温 ) 2 、流动相组分变化 ( 防止变化 ( 蒸发、反应等 )) 3 、色谱柱没有平衡 (在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱) K 、 保留时间不断变化 1、流速变化 ( 重新设定流速 ) 2 、泵中有气泡 ( 从泵中除去气泡 ) 3、流动相选择不恰当 (a 、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相 ) L 、 基线漂移 1、柱温波动 ,即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测 器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。 ( 控制好柱子和流动相的温度，在检测 器之前使用热交换器图 ) 2、流动相不均匀  ,流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。  ( 使用  HPLC 级的溶 剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。  ) 3、流通池被污染或有气体 硝酸。 (不要用盐酸 ))  (用甲醇或