从全血中抽提白细胞.docxVIP

从全血中分离白细胞 操作过程 ： 1． 用抗凝管收集全血，抗凝管需  EDTA材质或者柠檬酸钠材质，不能用肝素钠材质。 2． 全血白细胞分离：下列以 3ml 抗凝血为例说明。 a． 向一只 15ml 离心管中加入 3ml 抗凝血，而后加入 9ml 红细胞裂解液。盖紧管 盖，温柔的颠倒混匀数下。 请不要剧烈振荡。 b． 将离心管至于室温放置 10 min （ 5-10 min ，不要超过 10 min ）。 c． 将离心管以 2500 转离心 5 min 。 d． 弃上清， 尽可能将上清吸净，勿吸到管底白色班块细胞  。 e． 弃去上清后在管底出现可见的白色班块，此白色班块为富集的白细胞。如果裂解 不完全（白色班块里还有红色细胞） ，加入 1ml PBS 缓冲液重悬，然后重复 a－d 步骤 。 f． 充分裂解后，可用  1ml PBS缓冲液清洗一次， 2500 转离心 5 min。 g． 弃上清， 可获得血液样品中全部白细胞的 80％以上。而后可加入适量 Trizol （根 据细胞数量而定 5X106 加 1ml Trizol）后，用移液器充分吹打，混匀，直至出现清 亮不粘稠的液体，表示细胞充分裂解 。 h ． 而后可以把以上的 Trizol 试剂保存在生物冰中 -70 ℃ ，最后用干冰运输寄于我们。