考马斯亮蓝g法测定蛋白质含量.docxVIP

实验七 考马斯亮蓝G法测定的蛋白质含量 一、 实验目的： 1、 学习分光光度计的原理及操作； 2、 学习利用染色方法提高蛋白质消光系数，以提高分光光度法检测灵敏度。 二、 基本原理： 1、 根据物质的吸收光谱进行定性或定量分析的方法称为吸收光谱法或分光光度法 。该法 所用的仪器称为分光光度计或吸收光谱仪。该法所使用的光谱范围包括可见光和紫外光，即包 括波长在200 - 800 nm之间的光。 2、 分光光度计灵敏度高，测定速度快，应用范围广，其中的紫外 /可见分光光度技术更是 生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一。 3、 紫外区可分为紫外（近紫外）和真空紫外（远紫外） 。由于吸收池（又称样品池、比色 杯等）和光学元件以及氧气能吸收小于 190nm波长的光，因此常规紫外测定集中在近紫外区， 即 200nm-400nm。可见光区为 400nm -800nm。 Beer-Lambert 定律（朗伯-比尔光吸收定律）：A = — IgT =e b c A :吸光度，又称光密度“ O.D”。 T:透光度，T = I / I。（ I。为照射到吸收池上的光强， I为透过吸收池的光强） ￡：摩尔吸光系数或克分子吸光系数（ L ? mol — 1 ? cm — 1）。 b:样品光程（cm）,通常使用1.0cm的吸收地，b=1cm。 c：样品浓度（mol/L ）。 由上式可以看出：吸光度 A与物质