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第四节 酶蛋白主链修饰 ( 肽链有限水解 修饰 ) 酶蛋白的肽链被水解后，将可能出现以下 3 种情况： （ 1 ）若肽链水解后引起酶活性中心的破坏，则酶将 失去其催化 功能 。 可探测酶活性中心的位置。 （ 2 ）若将肽链的一部分水解后，仍可维持其活性中心的完整构 象，则酶的活力仍可保持或损失不多；但是其 抗原性等特性将 发生改变。 可提高药用酶的使用价值。 （ 3 ）若肽链的一部分水解后，有利于活性中心与底物的结合并 且形成准确的催化部位的话，则酶可 显示出其催化功能或使酶 活力提高 。 第四节 酶蛋白主链修饰 ( 肽链有限水解 修饰 ) ? 修饰方法： ? 使用某些专一性较高的蛋白酶或肽酶 ? 用其他方法使酶的主链部分水解 例：胃蛋白酶原的激活 HCl 胃蛋白酶原 pH1.5 ～ 2 （从 N 端失去 44 个氨基酸残基） 自身激活 胃蛋白酶 第五节 核苷酸链剪切修饰 ? 定义： 在核苷酸链的限定位点进行剪切，使酶 的结构发生改变，从而改变酶的特性和功能的 方法。 ? 举例： 四膜虫 26S rRNA 前体经过自我剪接作用形 成成熟的 26S rRNA ，最后得到一个 5 ′ 端失去 19 个 核苷酸残基的多功能核酸类酶 L-19IVS 第六节 氨基酸的置换修饰 定义： 将酶分子肽链上的某一个氨基酸换成另一个氨基 酸的修饰方法。 一、作用： 1 、可以提高酶的催化效率 2 、增强酶的稳定性 3 、使酶的专一性发生改变 二、氨基酸置换修饰的方法 1 、化学修饰法 Bender, Koshland 成功地用化学方法将枯草杆菌蛋白 酶活性的 Ser 变成 Cys ，修饰后酶对 pr. 和肽的水解能 力消失，却出现了催化硝基苯酯等底物水解的活性。 2 、定点突变技术（ Site directed mutagenesis) 指在 DNA 序列中某一个特定位点上进行碱基的改变从而 获得突变基因的操作技术。 是蛋白质工程和酶分子组成单位置换修饰中的常用技术 ? 蛋白质工程 上世纪 80 年底兴起的，也称为 第二代遗传工程 。 概念： 指通过改造与 pr. 相对应的基因中的碱基 排列次序，或设计合成新的基因，将它克隆到寄 主细胞中，通过基因表达而获取具有新特性的 pr. 的技术过程。 定位突变技术用于酶分子修饰的主要过程： （ 1 ）新的酶分子结构的设计 设计出获得的新的 酶 RNA 的核苷酸排列次序或酶 蛋白的氨基酸排列次序，确定要置换的核苷酸或 氨基酸及其位置。 Chapter 5 Modification of Enzyme Molecule 第五章 酶分子修饰 生命科学学院 付伟丽 4.1 什么是酶分子修饰？ ? 通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶 的催化特性的技术过程称为酶分子修饰。 即：在体外将酶 分子通过人工的方法与一些化学基团（物质），特别是具 有生物相容性的物质，进行共价连接，从而改变酶的结构 和性质。 酶分子修饰的意义 ? 提高酶的 活力 activity ? 增强酶的 稳定性 stability ? 降低或消除酶的 抗原性 immunological property ? 研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属 离子和各种物理因素对酶分子空间构象的影响 structure 酶分子的修饰方法 ? 金属离子置换修饰 ? 大分子结合修饰 ? 侧链基团修饰 ? 肽链有限水解修饰 ? 核苷酸链有限水解修饰 ? 氨基酸置换修饰 ? 核苷酸链置换修饰 ? 酶分子的物理修饰 第一节 酶的金属离子置换修饰 ? 定义： ? 把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性 和功能发生改变的修饰方法称为金属离子置换修饰。 ? 意义： ? 通过金属离子置换修饰，可以了解各种金属离子在酶催化 过程中的作用，有利于阐明酶的催化作用机制，并有可能 提高酶的催化效率，增强酶的稳定性，甚至改变酶的某些 动力学性质。 第一节 酶的金属离子置换修饰 ? 含有金属离子的酶举例： ? α - 淀粉酶中的钙离子（ Ca 2+ ），谷氨酸脱氢酶中的锌离子 (Zn 2+ ) ，过氧化氢酶分子中的铁离子 (Fe 2+ ) ，酰基氨基酸酶分 子中的锌离子（ Zn 2+ ） , 超氧化物歧化酶分子中的铜、锌离子 (Cu 2+ ,Zn 2+ ) ? 得失金属离子的影响： ? 若从酶分子中除去其所含的金属离子，酶往往会丧失其催化 活性。如果重新加入原有的金属离子，酶的催化活性可以恢 复或者部分恢复。若用另一种金属离子进行置换，则可使酶 呈现出不同的特性。有的可以使酶的活性降低甚至丧失，有 的却可以使酶的活力提高或者增加酶的稳定性。 一、金属离子置换修饰的方法 ? 1 、酶的分离纯化 ： ? 首先将欲进行修饰的酶经过分离纯化，除去杂质，获得