高中生物专题3《植物的组织培养技术》教案(1)新人教版选修1.pdfVIP

专题 3 植物的组织培养技术 在《生物技术实践》模块课程标准中，植物组织培养的具体要求是“尝试植物的组织培 养”。尝试是技能性目标中的模仿水平，即学生仿照教师的示范性动作完成对实验对象的操 作。 植物组织培养是一项操作复杂而精细，操作难度较大的实践活动，其操作流程包括：配 制母液、培养基配制与灭菌、外植体选择和消毒、接种、形成愈伤组织、诱导丛芽和生根、 组培苗移栽等操作环节。 从操作的持续时间看， 完成前四项活动需要一天， 后三项活动需要 1～ 2 个月。 为了确保在有限的时间内顺利地开展实验教学， 需要确定学生动手操作的一些重要环 节和步骤，并针对这些环节和步骤提前做好实验准备。 1 实验室的准备工作 本实验需要作好三项实验准备：一是提前配制各种母液；二是提前准备 MS培养基；三是 选择外植体并进行预处理。 1.1 配制母液 母液中含有大量元素、微量元素、激素（植物生物调节剂）和维生素等有机成分，母液 浓度是实际溶液浓度的 5～10 倍。配制母液花费时间多，需要用到溶量瓶、移液管等精密仪 器，无法由每位学生亲自操作，教师可带领部分学生在课外进行。母液的类型和配制顺序如 下： 配制母液的注意事项：⑴自来水或河水中含有大量的矿质元素，勿用配制母液；⑵配制 大量元素和微量元素母液时，应将每种化合物单独溶解后，再一一混合，同时还应用适量的 蒸馏水清洗烧杯内壁，并将清洗后的蒸馏水倒入混合溶液中，这样可以保证每种元素的浓度， 混合时要按照教材附表中的顺序进行，最后加入的是氯化钙溶液，这样可以避免发生沉淀； ⑶配制好的母液要先倒入 1 000 ml 烧杯中，再由烧杯转入 1 000 ml 细口瓶中，不可由容量 瓶直接倒入细口瓶中；⑷注意观察母液中是否有絮状物，出现絮状物表明离子之间发生反应， 需要重新配制母液；⑸植物生长调节剂难溶于水，需要碱或酸助溶，一般生长素类物质用碱 （0.1 mol/LNaOH1 ～3 ml ）或酒精（ 75～95 ％的酒精 1～3ml ）助溶，细胞分裂素类物质一般 用酸（ 0.1 mol/LHCL1 ～3 ml ）助溶，加入蒸馏水定溶时要缓慢，也可用水浴法助溶；⑹用棕 色细口瓶盛装有机物母液和植物生长调节剂母液，避免透射光损害母液中的有机成分；⑺在 瓶壁上贴好各种母液的标签（下图所示）；⑻将配制好的母液放入冰箱中或阴凉处保存。 MS是穆拉希吉（ Murashige ）和斯库克（ Skoog ）两位科学家第一个字母的缩写，他们于 1962 年为培养烟草而设计了一种培养基， 这就是组培使用中最为广泛的 MS培养基； 标签中间 一行的数字及单位表示的意义如下， 例如，100ml/L ，即配制 1升培养基只需从母液中提取 100ml 即可； 50mg/100ml ，表明 100ml 母液中含有 50mg萘乙酸，如取 4mg 的萘乙酸，只需提取 8ml 母液。 除母液需提前配制好外， 消毒液也需要提前配制好。 外植体消毒一般采用 75％的酒精、2～ 10％的次氯酸钠溶液等。 1.2 培养基的配制与灭菌 培养基的类型有很多种，通常采用 MS培养基。配制培养基的流程如下： 上述的培养基配制流程中，加入各种母液的时间是在琼脂溶化之后，这样既可避免加热 使母液中的各种离子发生反应，又可避免有机物母液和植物生长调节剂因高温受到损害。将 母液加入培养基的顺序是：先提取大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，后提取植物生 长调节剂母液，切勿先提取植物生长调节剂母液，这是因为该溶液中含有酸或碱，容易与其 他元素形成沉淀而失败。 培养基通常采用高压蒸汽灭菌， 灭菌时间一般为 15～ 20min ，灭好菌的培养基不易保存过 长时间，通常是现用现配。在对培养基灭菌的同时，也要对解剖刀、镊子、烧杯、锥形瓶、 牛皮纸等必要的仪器设备进行灭菌。 1.3 外植体的选择和预处理 根据植物细胞的全能性原理，选择任何活的