大孔吸附树脂对堆肥过程中抗生素抗性基因及细菌群落的影响.pdfVIP

ABSTRACT 摘 要 抗生素抗性基因（ARG ）是一种新型环境污染物，可通过移动基因元件（MGE ） 以水平基因转移的方式在微生物间传播。ARGs 污染可能会导致人类致病菌对抗生素药 物的抵抗能力增加，严重威胁人类生命健康。随着养殖业的集约化发展，抗生素作为 饲料添加剂在畜禽养殖中被大量使用，过量的抗生素不被动物肠道吸收，随粪便排出 体外。因此畜禽粪便已成为重要的 ARGs 储存库。本试验选用具有吸附性能的新型材 料大孔吸附树脂（MAR ）作为堆肥添加剂，研究了添加0 （CK ）、5% （L ）和15% （H ） MAR 对猪粪好氧堆肥过程中堆肥理化性质，有效态铜和有效态锌，ARGs 丰度和MGEs 丰度以及微生物群落的影响，并分析了 ARGs 与环境因子、微生物群落之间的关系。 主要研究结果和结论如下： （1）三个处理的堆体温度都达到了50°C 并持续 6 天以上，达到了堆肥产品无害 化标准，最高温达到 68℃。堆料的pH 值在堆肥初期都呈现下降，而后回升，L 和H 处理的pH 恢复速率减慢。添加 MAR 显著降低了堆料中生物有效态铜和生物有效态锌 的含量，但对堆料的C/N 无显著影响。 （2 ）样品中共检测到11 种ARGs ，其中9 种ARGs 在堆肥结束后其相对丰度有明 显降低。广泛存在的sul1 与sul2 基因在堆肥结束后分别下降了79.60%‒86.35%和94.38% ‒96.31% 。检测到的4 个MGEs 中ISCR1 与Tn916/1545 在堆肥结束后分别下降了98.80% ‒99.48%与97.06%‒99.21% 。在添加MAR 处理中，intI 1 和Tn916/1545 下降幅度比不添 加MAR 的处理更显著。 （3 ）厚壁菌门、变形菌门和放线菌门是堆肥样品中主要的微生物。添加MAR 能 够通过影响特定微生物进而改变微生物群落结构。RDA 分析表明MGEs 对ARGs 在堆 肥过程中的变化解释度最高，且堆肥进程是推动微生物群落演替的主要驱动力。 Network 分析发现了 14 个属与9 个丰度下降的ARGs 、MGEs 组成模块，12 个属和2 个丰度上升的 ARGs 组成模块。堆肥过程中潜在宿主菌丰度下降可能导致其携带的 ARGs 丰度降低。多个ARGs 与MGEs 共现表明这些ARGs 可能与MGEs 在同一基因 片段上共存，并随MGEs 在环境中转移和传播。 关键词：抗生素抗性基因；微生物群落；堆肥；大孔吸附树脂；移动基因元件 I 目 录 目 录 摘 要 I ABSTRACT III 第一章 绪论1 1.1 研究背景1 1.2 国内外研究进展2 1.2.1 畜禽粪便中的抗生素抗性基因和重金属2 1.2.2 抗生素抗性基因的传播机制和削减方法3 1.2.3 堆肥中添加剂的应用4 1.2.4 大孔吸附树脂的特征及应用6 1.3 研究内容和技术路线7 1.3.1 研究内容7 1.3.2 研究意义7 1.4 技术路线7 第二章 大孔吸附树脂对有效铜、有效锌含量及理化性质的影响9 2.1 材料与方法9 2.1.1 试验设置9 2.1.2 样品采集10 2.1.3 测定项目与方法10 2.1.4 数据分析 11 2.2 结果与分析 11 2.2.1 大孔吸附树脂对堆肥温度的影响 11 2.2.2 大孔吸附树脂对堆肥 pH 的影响12 2.2.3 大孔吸附树脂对堆