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菌种生产操作工艺规范 一、 试管母种制作 、扩繁及培养： 1．配方 (1)PDA 培养基 : 土豆 ( 去皮 )200g 葡萄糖 20g 琼脂 18-20g 水 1000ml PH 值自然。 (2) 综合培养基 : 土豆 ( 去皮 )200g 葡萄糖 20g 琼脂 18-20g 1 磷酸二氢钾 3g 硫酸镁 1.5g 维生素 B 10mg 水 1000ml PH 值 自然。 (3) 树汁培养基 : 树汁培养基 40g 啤酒 100ml 温水 1000ml PH 值 自然。 2．培养基配制 ·PDA培养基 (1) 选择质量好的土豆 , 洗净后去皮 , 切成 2mm薄片 , 并根据配方准确 称量 , 加入 1000ml 水煮沸 30 分钟（无白心） , 用 4-6 层纱布过滤 , 取 其汁液 , 并加水补至 1000ml。 (2) 将琼脂加入土豆汁中 , 以小火加热至全部溶化， 在加热过程中要不 断搅拌 , 以防溢出和焦底。 (3) 加入葡萄糖和其它营养物质使其溶化 , 调节 PH值为自然。 ·树汁培养基 将树汁培养基放入锅中 , 加啤酒活化搅拌 , 泡沫消失后 , 加入温水 搅拌加热煮沸 , 趁热分装试管。 3．分装试管 (1) 制备好的培养基应趁热分装 , 装量为试管长度的 1/4-1/5, 试管口 沾附的培养基要擦净。 (2) 分装完毕 , 塞上棉塞 ,7 支一捆 , 用两层报纸或一层牛皮纸捆扎好， 直立放入灭菌锅桶内。 (3) 棉塞松紧适度 , 以用手提起棉塞而试管不脱落为度 , 棉塞长度 3-5cm, 塞入试管中的长度约占总长的 2/3 。 (4) 棉塞制作宜选用质量好的普通棉花 , 不宜使用脱脂棉或夹杂晴纶 棉等杂质。 4．灭菌 (1) 向灭菌锅内加水至水位标记高度 , 不能过多或过少 , 过少易烧干造 成事故 , 过多棉塞易受潮 ; 引起杂菌污染。 (2) 对称拧紧锅盖上螺丝 , 勿使漏气 , 打开放气阀 , 加热灭菌。 (3) 当有大量蒸汽从放气阀中快速排出时 , 关闭放气阀 , 继续加热。 (4) 当压力达到 1.0kg/cm 2 时, 开始计时 , 并调节火力大小 , 维持 45 分 钟后 , 停止加热 , 自然缓慢降压。 (5) 待压力下降到零时打开放气阀 , 缓慢排出残留蒸汽 , 打开锅盖 , 稍 留一缝盖好保持 10-15 分钟 , 利用余热烘干棉塞。 (6) 趁热摆斜面 , 并覆盖棉布 , 以防冷凝水凝结。 (7) 灭菌锅补足水量 , 以备继续使用。 5．转管、扩繁 (1) 将待转保存菌株从冰箱领出 , 经 24 小时活化后使用。 (2) 将经过活化的菌株及空白斜面培养基及酒精灯、 接种铲、接种钩、 75%酒精棉球、火柴等用具整齐放入接种箱内 , 根据接种箱体积计算用 药量 , 密闭熏蒸消毒 45 分钟。 (3) 接种时 , 戴乳胶手套 , 进入接种箱后用 75%酒精双手彻底消毒 , 待双 手酒精挥发后 , 点燃酒精灯 , 对接种铲、接种钩过火杀菌 , 冷却备用。 （4 ）转接时，母种试管口过火杀菌 , 然后用冷却