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1、 相对离心力(RCF)：实际离心加速度转化为乘力加速度的倍数，“xg”。 2、 K系数:描述在一个转子中，将粒子沉降下来的效率，即溶液恢复成澄淸程度的一个指数，也叫“澄淸指 数”。 K={2.53* 1011* ln(Rmax/Rmin))/(rpm)2=STRmax 转 /最大半径 Rmin 转子最小半径 3、 沉降系数(S):颗粒在单位离心力场中沉降的速度。 S = V/w2r (S沉降系数，3角速度(rad/s), r半径，v沉降速度) 1ST0-13 , —个“斯维徳伯格(Svedberg)o 4、 沉降速度： 在强大离心力作用下，单位时间内物质运动的距离。 当pppm,贝!jS0,粒子顺着离心方向沉降。 当pp = pm,则S=0,粒子到达某一位置后达到平衡。当pPpm,则S0,粒子逆着离心方向上浮。 5、 离心机的分类： 制备型与分析型离心机的比较 转速 冃的 制备型离心机 分析型离心机 使用范围 6000 rpin 用于细胞(核)、菌体、培养基 低速离心机 残渣、血液酶的结晶等较人颗粒的 (2000?7000 g) 分离 25000 rpm 高速离心机 收集微生物、细胞碎片、细胞(核、 (8000-80000 g ) 器)、大分子沉淀物等分离 30000 rpm 利用光学系统连续监测物质 用于DNA、RNA、蛋白质、细胞器、 超速离心机 在离心场屮的行为，进而推断 病毒分离纯化；检测纯度；沉降系 (100000?600000 其纯度、形状和相对分子质量 数和相对分子杲测定等。 等性质：化学性质不能分析 应用 分离生物材料， 研究纯品、核蛋白体等大分子 分离样品容最大 物质的特性，样品容最较小 6、等密度梯度离心 原理：依赖于样品颗粒的不同密度來进行分离。 方法：离心前预先配制介质的密度梯度，也可依靠离心力來形成梯度，样品可铺在梯度液之上、之下或混 在一起。 常用介质：CsCl 适用：蛋白质、核酸等大分子物质的分离。 缺点：处理量小、限实验室规模。 7、 简述分离人外周血单个核细胞的方法和过程？ 方法：聚蔗糖■泛影葡胺（Ficoll-Urografin）密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC） 1.在离心管加入适最淋巴细胞分离液，去肝素抗凝血于等最RPMI640充分混匀，用滴管沿管唯缓慢叠加于 分层页面上，注意保持清楚界面 2.2OOOrpm水平离心20min,离心管内氛围三层，上层为血浆和RPM1640液，下层为红细胞和粒细胞。中 层为淋巴细胞分离液，在上中层界面中有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带（包含血小板） 3用毛细管插入到云雾层，吸取单个核细胞，置入新离心管屮，加入5倍以上体积的RPM1640, 1500rpm 离心lOmin,洗涤细胞两次 末次离心后，齐上清，加入含有10%小牛血清的RPM1640,重悬细胞 取10ul细胞悬液于10%0.2%台吩兰染液混合，于血球计数板上，计数后得到细胞浓度=（4个大方格细胞 总数/4）* 10⑵*2 细胞活力检测,似得细胞可被染成蓝色，活细胞不着色,呈透明。 分离PBMC： 90%以上纯度，80%~90%得率，活细胞比率可达95%。 8、 破碎时的主要阻力： 细菌G+/G——肽聚糖的网状结构 酵母菌一唯结构交联的紧密程度和它的悖度 霉菌一几丁质或纤维素的纤维状结构 9、 过滤与分离技术的比较？ 过滤 离心 原理依据过滤介质的孔隙大小进行分离 在离心产生的力场作用下，加快颗粒的沉降 特点 大颗粒固体分离，操作简单，适工业应用 颗粒小，热稳定性差物质冋收，实验室适用 缺点 速度慢，分离效果差异大，劳动强度大 操作成木高，产量小，效率低 适用 丝状菌（霉菌、放线菌）等 1?10um单细胞的细菌、酵母菌 10、细胞破碎方法的分类？ 机械法：珠解法一常用方法 高压匀浆法一大规模破碎细胞常用方法 超声波破碎法一强烈的细胞破碎 非机械破碎方法：①物理：渗透压冲击法一故温和 冷冻■融化法 化学：碱处理一主要用于两性物质（蛋白质） 酸热法 化学渗透法（螯合剂EDTA、有机溶剂法、表面活性剂、变性剂） 生化法：爾溶法一研究较广 干燥法 超临界细胞破碎技术 11、 选择结合两种或两种以上破碎方法，对原核细胞表达的匝组蛋口进行细胞破碎。 （可先用非机械法再用机械法：只考虑效率与蛋白质戢一酶溶+超声：考虑成本和蛋白质戢一酶溶+珠擁） 珠螂法:细胞悬浮液与研擁剂一起髙速搅拌，互相碰撞、剪切，使细胞破碎，释放内含物。 高压匀浆法：细胞经历高速造成的剪切、碰撞和高压到常压的突变，造成细胞唯的破坏和细胞膜的破裂。 超声波破碎法：超声波（l5-25kHz）弓I起液体产生空穴作用，局部空穴的形成、増大和闭合产生极大的冲击 波和剪切力，引起的粘滞性旋涡在细胞上造成剪切力，从而使细胞破碎。