脂肪酶催化樟树籽仁油和大豆油合成中长碳链甘油三酯及其分离纯化.pdfVIP

摘 要 摘 要 中长碳链甘油三酯是一类天然油脂的改性产品，因其既可快速高效地为机 体提供能量而不造成脂肪累积，又可为人体提供必需脂肪酸而成为油脂研究领 域的焦点。本研究以资源丰富、至今未被充分利用的天然中碳链油脂—樟树籽 仁油和大宗油料—大豆油为原料，在无溶剂体系下通过固定化脂肪酶催化酯交 换法制备中长碳链甘油三酯。通过比较三种固定化脂肪酶的催化酯交换效果， 确定 Novozym 435 脂肪酶为最合适的催化剂。影响酯交换反应的条件有：底物 摩尔比（樟树籽仁油/大豆油）、加酶量、反应温度、反应时间。在单因素实验 的基础上，设计四因素三水平的 BBD 响应面实验，优化并确定中长碳链甘油三 酯的制备条件。实验结果表明，Novozym 435 脂肪酶在无溶剂体系下催化樟树籽 仁油和大豆油制备中长碳链甘油三酯的最佳酯交换反应条件是：樟树籽仁油/大 豆油（mol/mol ）为 1.2、加酶量为总底物的 10.5% （wt/wt % ）、反应温度为65°C 和反应时间为 10.6h，最佳酯交换反应条件下的中长碳链甘油三酯的最高产率为 74.82% 。经过放大实验，然后将酯交换产物经过二级分子蒸馏方法得到纯度为 94.92% 的中长碳链甘油三酯。纯化后中长碳链甘油三酯的主要甘油三酯成分为 COC/CPC (37.28%)、CLC/CLnLa/CLnLn (18.67%)、LaLL/LaOLa/LaPLa (11.62%) 、 CLL (7.83%) 以及LaLL/LaLLa/LaLnL (9.26%) 。进一步比较了樟树籽仁油、大豆 油、物理混合、酯交换产物、纯化后的中长碳链甘油三酯的脂肪酸组成和分布， 结果表明中长碳链甘油三酯的总脂肪酸包含61.37%的中碳链脂肪酸和38.63%的 长碳链脂肪酸，饱和脂肪酸的含量为 68.99%，不饱和脂肪酸的含量为 31.01% 。 中长碳链甘油三酯分子的 sn-2 位主要富含油酸（16.59%）和亚油酸（33.47% ）， sn-1,3 位主要富含癸酸（43.80% ）和月桂酸（31.34% ）。另外中长碳链甘油三酯 的各项理化性质指标都符合国家标准。然后分析酯交换反应中 Novozyme 435 脂 肪酶的操作稳定性，研究表明保持 80% 以上的酶活至少可以重复使用 15 次。由 于这种构型的中长碳链甘油三酯对人体有益，可以作为一种营养添加剂，在功 能性油脂、保健品、医疗食品等领域具有较大的应用潜力。 关键词: 中长碳链甘油三酯；樟树籽仁油；大豆油；响应面；分子蒸馏 I 目 录 目 录 第 1 章 绪论 1 1.1 中长碳链甘油三酯的由来和概述1 1.2 MLCT 的理化性质与代谢特性1 1.3 MLCT 的制备3 1.3.1 化学法 3 1.3.2 酶法 3 1.4 MLCT 的产品与应用6 1.4.1 MLCT 在食品工业的应用 6 1.4.2 MLCT 在医药工业的应用 9 1.5 本课题的研究意义和内容 10 1.5.1 研究意义 10 1.5.2 研究内容 11 1.5.3 技术路线图 13 第 2 章 固定化脂肪酶催化樟树籽仁油和大豆油合成MLCT 14 2.1 材料和仪器 14 2.1.1 主要材料与试剂 14 2.1.2 主要仪器与设备 15 2.2 实验方法 15 2.2.1 酯交换反应 15 2.2.2 甘油三酯组成的测定 15 2.2.3 总脂肪酸组成的测定 16 2.2.4 sn-2 位