长寿老人源植物乳杆菌改善小鼠衰老的益生性评价及其机制探究.pdfVIP

摘要 摘要 益生菌在调节胃肠道微生态平衡、增强机体抗氧化能力、调节机体免疫力和 延缓衰老等方面有特殊生理活性。中国长寿地区分布广，益生菌资源丰富，然而 特色菌种的挖掘利用匮乏，益生菌延缓衰老的分子机制鲜有探究。湖南省浏阳市 高田村居民寿命90 岁以上较为常见，远高于中国人均预期寿命，迄今尚无对该 地区居民长寿原因的研究。为此，本文在系统分析浏阳高田村居民肠道菌群结构 的基础上，分离筛选出乳酸菌菌株，重点对一株植物乳杆菌的益生功能进行了评 价，对其抗氧化、保护肠屏障和延缓机体衰老的分子机制进行了初步探究。 通过对高田村长寿老人粪便微生物菌群结构的分析，发现其菌群多样性高于 其他地区人群，且高田村居民肠道菌群相似性较高。高田村居民肠道微生物含有 特有248 个OTU，远高于对照组的60 个，其包括甲烷细菌属（Methanobacterium ） 等特殊菌属，进一步用 RT-qPCR 证实了高通量测序的结果，高田村居民的乳酸 菌丰度比对照组高40 余倍。 采用传统微生物分离方法从21 名长寿老人肠道菌群中获得90 株菌，分别为： 15 株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum ），25 株发酵乳杆菌（L. fermentum ）， 32 株粘膜乳杆菌（L. mucosae ），16 株唾液乳杆菌（L. salivarius ），1 株海氏肠球 菌（Enterococcus hirae ）和1 株粪肠球菌（Enterococcus faecalis ）。经过耐受过氧 化氢，模拟胃液和肠液以及清除自由基能力评价，筛选出三株性能优良菌株：植 物乳杆菌FLPL05 、FLPL0302 和FLPL0902 ，用于衰老模型小鼠的干预研究。 采用D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型评价上述植物乳杆菌的安全性和益生性。 结果发现，植物乳杆菌FLPL05 对肝功能具有保护作用，显著降低了血清中谷丙 转氨酶（ALT ）（P0.05 ）和谷草转氨酶（AST ）水平 （P0.01 ），对血糖血脂和 肾功能无显著影响 （P ＞0.05 ）。体内抗氧化能力结果表明，植物乳杆菌FLPL05 显著提高了血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX ）（P0.05 ）和肝脏总超氧化物酶 （T-SOD）（P0.001）的活性，降低血清丙二醛（MDA ）水平 （P0.05 ），上调 小肠的抗氧化基因 （MT1 ，MT2 ，GPx1 和GPx2）转录水平。共孵育后，植物乳 杆菌FLPL05 显著上调了HT-29 细胞的PRG1 、MT1A 、MT1M 和BCL2 基因转录 水平，Caco-2 细胞的PRG1 、GPX2、MT1A 、MT1M 和BCL2 基因转录水平。 进一步采用自然衰老小鼠为模型，比较植物乳杆菌FLPL05 和FLPL0302 延 长寿命，调节肠道菌群的能力。结果表明，长期饲喂植物乳杆菌FLPL05 ，显著 延长了小鼠30%的平均寿命。菌群多样性分析结果表明，植物乳杆菌FLPL05 干 预后，小鼠肠道菌群在门水平表现为：厚壁菌门增多、拟杆菌门减少；在属水平， I 摘要 乳杆菌属（Lactobacillus ）、脱硫弧菌属（Desulfovibrio ）和阿克曼氏菌属 （Akkermansia ）比例增多，费克蓝姆氏菌属（Facklamia ）、梭菌属（Clostridium ） 和瘤胃球菌属（Ruminococcus ）减少。 为阐释植物乳杆菌FLPL05 延缓小鼠衰老，促进健康的作用，采用蛋白组学 技术对小鼠肠道表达蛋白进行了解析。结果表明，植物乳杆菌FLPL05 干预后肠 道共有 197 个蛋白上调表达，124 个蛋白下调表达。GO 数据库的功能归类和分 析表明，这些蛋白共参与25 类生物学过程1982 条款，16 类细胞组成365 条款， 12 类分子功能341 条款，功能主要涉及氧化还原酶类、生物调节、粘附功能、代 谢过程、突触、对刺激的反应、生物过程调节及调控、细胞的紧密连接和钙黏素 等。表达的差异蛋白通过KEGG 数据库分析显示，参与236 条信号通路，涉及 免疫系统、运输和分解代谢等通路。 体内实验证实，植物乳杆菌FLPL05 降低了衰老所致的炎症水平升高、抑制 了肠道通透性增大的发生，通过