雪旺氏细胞Lrp4在神经再生中的功能研究及末梢雪旺氏细胞特异标记物筛选.pdfVIP

摘 要 摘 要 雪旺氏细胞是外周神经的胶质细胞，在发育中来源于神经嵴细胞。雪旺氏细 胞主要分为两类，一类是包裹神经轴突的髓鞘化雪旺氏细胞，另一类是不形成 髓鞘的雪旺氏细胞。其中不形成髓鞘的雪旺氏细胞研究较多的是位于运动神经 末梢周围的末梢雪旺氏细胞。有研究表明雪旺氏细胞不仅对发育中运动神经元 投射很重要，在外周神经轴突损伤后修复中也发挥了重要功能。 由创伤或非创伤因素引起的外周神经损伤是一种常见疾病，导致病人语言、 运动等功能受损。神经损伤后恢复在当前仍是医学领域的巨大挑战。不同于中 枢神经，外周神经轴突的特点之一是其具有再生能力。在轴突再生过程中，脱 去髓鞘的雪旺氏细胞为神经再生提供了很多重要信号 （本文所提到的关于外周 神经再生即轴突再生）。其改变原有形态，转变为类似不成熟的雪旺氏细胞类型。 这些所谓的不成熟雪旺氏细胞立即启动一系列修复相关信号，如上调表达神经 营养因子，激活髓鞘自噬和招募巨噬细胞等。此外，这些细胞排列起来形成通 路引导神经到达其靶标。轴突再生恢复后，在外界环境适宜情况下，雪旺氏细 胞重新形成髓鞘包裹轴突。末梢雪旺氏细胞在神经肌肉接头突触发生、突触修 剪、乙酰胆碱受体传递及神经肌肉接头再生中发挥重要作用。总体而言，尽管 雪旺氏细胞在神经再生中有很多形态及转录层面的变化，但目前对其在神经再 生中的作用机制依旧不清楚。 Lrp4 （lipoprotein-relatedprotein 4，低密度脂蛋白受体相关蛋白4）对神经肌 肉接头突触前正常投射及成年后突触末梢的维持有重要功能。在中枢神经系统 Lrp4 ATP Lrp4 的星形胶质细胞中， 可以调控 释放，敲除星形胶质细胞的 对缺血 性脑损伤起到了一定保护作用，然而Lrp4 在外周神经系统胶质细胞中的功能并 不清楚。 神经肌肉接头是运动神经末梢投射到肌纤维上形成的化学突触。在外周神经 损伤研究中，神经肌肉接头常被用作评判神经再生快慢的模型，也是判断末梢 雪旺氏细胞引导神经末梢再生的模型。然而目前对于雪旺氏细胞的研究多集中 于髓鞘化雪旺氏细胞，对位于神经肌肉接头的末梢雪旺氏细胞关注较少。且目 前对于雪旺氏细胞的标记多集中于对所有类型的标记，未发现末梢雪旺氏细胞 特异标记物，因此对此类细胞的研究仍停留在形态学观察水平，对于其参与引 I 摘 要 导神经末梢再生的分子机制目前仍不清楚。 本文第一部分探究了雪旺氏细胞中Lrp4 在神经再生中的作用。研究发现， 在雪旺氏细胞敲除Lrp4 会引起神经再生加快，而该现象由损伤后脱髓鞘雪旺氏 细胞大量增殖引起。进一步研究发现，神经损伤后Lrp4 敲除小鼠中雪旺氏细胞 脱髓鞘更快。电镜结果发现，敲除小鼠受损神经远心端的髓鞘碎片更少而且新 生成的轴突数量更多。以上实验结果表明，敲除Lrp4 的雪旺氏细胞在神经损伤 后通过大量增殖来清理髓鞘碎片从而促进神经再生。 为更好的研究末梢雪旺氏细胞在神经肌肉接头再生中的分子机制，本文第二 部分采用单细胞测序技术，筛选末梢雪旺氏细胞特异型标记物。通过搭建单细 胞取样平台，分别挑取了髓鞘化雪旺氏细胞及末梢雪旺氏细胞。本研究探索了 对这些细胞进行单细胞挑取、转录组扩增及文库构建的实验条件。通过对测序 结果的分析发现，髓鞘化雪旺氏细胞和末梢雪旺氏细胞表达不同水平髓鞘相关 转录本。这一发现为寻找末梢雪旺氏细胞的特异标记奠定了基础。进一步的分 析正在进行中。 关键词：雪旺氏细胞；轴突再生；增殖；末梢雪旺氏细胞；单细胞测序 II 目录 目 录 第一章 雪旺氏细胞敲除Lrp4 促进神经再生············································1 1.1 引言···························