合浦珠母贝外套膜组织和血细胞在贝壳生长中的作用研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 合浦珠母贝是重要的海水珍珠养殖贝类，其贝壳结构与珍珠类似，是具有良 好机械性能的生物矿物。因此了解其贝壳的形成机理有助于提高人工养殖珍珠的 产量和品质，并为制造仿生材料提供指导。本课题以合浦珠母贝为研究对象，探 讨外套膜组织和血细胞在贝壳生长过程中的调控作用。 在贝壳损伤修复过程中，外套膜在空间上的位置和形态直接决定了再生贝壳 的微观结构。同时，外套膜可以通过上调有机基质的分泌来增加碳酸钙的成核位 点，从而加速贝壳的再生。在平板珍珠的形成过程中，套膜区外表皮细胞的组成 和基因的表达都发生了显著的变化；而在间液腔中插入弧形玻片时，只有贴近外 套膜的一面有碳酸钙沉积，说明外套膜在碳酸钙的沉积中起到了直接的指导作用。 进一步探究外套膜分泌贝壳组分的过程表明外套膜通过分泌泡将有机基质直接分 泌到贝壳的生长界面上。间液蛋白的质谱分析表明外套膜分泌的大部分基质蛋白 并不以游离的形式存在于间液中。我们推测基质蛋白可能是从外套膜细胞上直接 被分泌到矿化界面，从而调控贝壳的生长。 血细胞作为主要的免疫细胞，被认为参与了贝壳的矿化过程。我们的研究结 果表明血细胞可以出入间液腔，其组成与循环系统中的血细胞一致。当间液腔中 存在大量的微生物时，珍珠层的沉积会受到严重影响，并导致贝壳疾病的发生。 而血细胞可以凝集并吞噬病原微生物，通过发挥细胞免疫和体液免疫来维持间液 腔的微环境，保证贝壳沉积的顺利进行。在受到免疫刺激和贝壳缺刻损伤刺激后， 血细胞显著上调钙代谢相关的基因。同时我们也发现了一类特殊的颗粒血细胞， 这些血细胞能够富钙元素，并且能够快速迁移，可能是钙的运输载体。这表明血 细胞可以通过在贝壳形成过程中起到了免疫保护和潜在的钙库的作用。 此外，我们还探索了合浦珠母贝中棱柱层的多边形排列的演变规律和形成机 理。我们在棱柱层中发现了两种不同的生长模式，即水平扩张时的Voronoi 分布和 垂直生长时的二维泡沫演变。这两种方式都是由热力学规律驱动的。有机基质的 异质性分布则为棱柱层按照特定规律进行生长确定了边界条件。 本课题研究结果阐明了外套膜直接调控了贝壳的生长过程主导作用，而血细 胞起到了保障和促进贝壳生长的辅助作用，这加深了我们对贝壳生长的上游细胞 调控过程的理解，为珍珠的科学养殖提供了一定的理论支撑。 关键词：合浦珠母贝；外套膜；血细胞；矿化；免疫 I 目 录 目 录 第1 章 前言 1 1.1 生物矿物和生物矿化 1 1.1.1 生物诱导矿化 2 1.1.2 生物控制矿化 3 1.1.3 矿物的非经典结晶过程 6 1.1.4 研究生物矿化的意义 8 1.2 软体动物贝壳的生物矿化 9 1.2.1 软体动物的贝壳结构 9 1.2.2 生物大分子调控作用 10 1.2.3 外套膜主导了贝壳的生长11 1.2.4 血细胞在免疫和矿化中的作用 14 1.3 贝壳生长模型的研究 17 1.4 研究内容与目的 20 1.5 论文各部分主要内容 22 第2 章 实验材料与方法 23 2.1 实验材料 23 2.1.1 化学试剂 23 2.1.2 仪器设备 25 2.2 实验方法 25 2.2.1 合浦珠母贝的购买和饲养 25 2.2.2 患病合浦珠母贝的鉴别和样品收集 25 2.2.3 碳酸钙晶型的鉴定 26 2.2.4 SDS蛋白质电泳分析血细胞蛋白 26 2.2.5 蛋白质谱分析血细胞和间液蛋白 26 2.2.6 外套膜和血细胞的组化分析 26 2.2.7 扫描电子显微镜观察贝壳和外套膜组织 27 2.2.8 透射电