合浦珠母贝Pf-Rel对MSI60和Prismalin-14的调控研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 合浦珠母贝在水产养殖中主要用于生产珍珠，而贝壳和珍珠均是典型的生物 矿化产物。已有大量实验证实，多种基质蛋白在合浦珠母贝贝壳的形成中发挥了 重要作用。因此，对于基质蛋白的研究也成为矿化机理研究的重点。然而，有关 转录因子对基质蛋白调控机理的研究还处于探索初期。 NF-кB 信号通路在骨骼系统与免疫系统中均起到了重要作用，Pf-Rel 作为 Rel/NF-κB 家族，被认为是该通路的关键转录因子，能够进入细胞核与DNA 结合， 从而调控下游基因的表达。Prismalin-14 和MSI60 分别在棱柱层和珍珠层的形成中 发挥重要作用。本课题重点研究了 Pf-Rel 转录因子对基质蛋白 Prismalin-14 和 MSI60 的表达调控情况，并初步探究Pf-Rel 转录因子对两种基质蛋白的调控机理。 在本论文中，通过检测合浦珠母贝中贝壳肌、生殖腺、鳃、足、心脏、外套 膜中心和外套膜边缘七部分组织中Prismalin-14 和MSI60 基因的相对表达量，我 们发现二者在主要分泌基质蛋白的外套膜中表达量较高。此外，我们发现Pf-Rel ， Prismalin-14 和MSI60 三种基因在贝壳损伤后都出现相对表达量升高的情况，并存 在时间上的先后规律，表明三者在贝壳形成中均可能发挥了作用。我们使用RNAi 方法将Pf-Rel 基因沉默，发现Prismalin-14 和MSI60 基因的相对表达量均显著降 低，证明转录因子Pf-Rel 能够对Prismalin-14 和MSI60 基质蛋白起到表达调控作 用。之后，我们将带有Prismalin-14 和 MSI60 启动子的荧光素酶报告载体与不同 剂量的Pf-Rel 报告载体分别转染进入HEK-293T 细胞，检测荧光素酶活性。我们 发现随着Pf-Rel 报告载体剂量的提高，含Prismalin-14 和MSI60 启动子的报告载 体的荧光素酶活性也随之提高，证明Pf-Rel 可以激活Prismalin-14 和MSI60 启动 子。最后，通过启动子截短体实验，我们发现 Pf-Rel 在 Prismalin-14 启动子上的 -1794bp 到-1599bp 之间存在激活区域，在MSI60 启动子上的-2244bp 到-1441bp 之 间存在激活区域。 综上所述，Pf-Rel 转录因子在Prismalin-14 和MSI60 启动子上存在激活区域， 能够激活启动子，从而促进Prismalin-14 和MSI60 基质蛋白的表达。 关键词：合浦珠母贝；NF -кB 信号通路；Pf-Rel ；Prismalin- 14；MSI60 I 目 录 目 录 第1 章 前言 1 1.1 生物矿化 1 1.1.1 生物矿化概述 1 1.1.2 基质蛋白在贝类生物矿化中的作用 1 1.2 NF-B 信号通路 3 1.2.1 NF-B 信号通路概况 3 1.2.2 NF-B 信号通路与免疫系统 5 1.2.3 NF-B 信号通路与骨骼系统 5 1.2.4 NF-B 信号通路与生物矿化 6 1.3 合浦珠母贝Pf-Rel ，Prismalin-14 和MSI60 的研究情况 7 1.3.1 Pf-Rel 的研究情况 7 1.3.2 Prismalin-14 的研究情况 8 1.3.3 MSI60 的研究情况 10 1.4 研究的目的和意义 10 1.5 论文各部分主要内容11 第2 章 实验材料与方法 13 2.1 主要实验材料和试剂 13 2.2 主要实验仪器 13 2.3 实验方法 14